糖化血红蛋白的测定方法？

糖化血红蛋白测定（glycosylated hemoglobin A，GHb） 成人红细胞中的血红蛋白有HbA（占95％～97％以上），HbA2（占2.5％），HbF（占0.2％）。当HbA中的部分血红蛋白被糖基化后，其中由于HbA的β链N末端的缬氨酸分子与葡萄糖等己糖分子相结合而使其在血红蛋白电泳中成为HbA之前的快泳、HbA1组分，在离子交换柱层析中亦在HbA之前首先被洗脱，糖化Hb可分为HbA1a（其中与1，6-二磷酸果糖结合的为HbA1a1；与6-磷酸葡萄糖结合的为HbA1a2），HbA1b（尚无明确定义，包括HbA1b1，HbA1b2，HbA1b3），HbA1e（与葡萄糖结合）和HbA1d（α链和β链内氨基以及α链的N末端基团上的烯化血红蛋白；包括HbA1d1，HbA1d2，HbA1d3）共九种。最重要的是HbA1c.HbA1e的生成量取决于血糖的浓度，正常人约占4％～6％。由于红细胞的半寿期是60天，所以GHb的测定可以反映测定前8周左右病人的平均血糖水平。 GHb测定方法很多，两种最基本的方法是：测定HbA1组分和仅测定HbA1c.高压液相色谱（HPLC）法可精确分离HbA1各组分；并分别得出HbA1a、HbA1b、HbA1c、HbA1d的百分比，CV3％，是参考方法，其次还有低压液相色谱（LPLC），目前二者均有高精度的自动化仪器，作为常规方法用于临床；硼酸亲和柱层析法CV（1％～4.7％），阳离子交换柱层析法CV（2％～16％），测定的血红蛋白类型为HbA1.前者在样本量不大的实验室仍可使用；后者在分离过程中对pH和温度的要求极高，HbF是其干扰因素。电泳法CV（4％～10％），分离Hb类型和干扰因素与阳离子交换柱层析法相同；比色法可用于自动生化仪，无血红蛋白分离步骤，干扰因素小，具特异性和敏感性，但CV较大（4％～18％），且样品用量大，用浓度单位报告的方式还未被广大临床医师接受。