southern blot验证细菌基因敲除,怎样设计探音族烧支威针

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一、Southern印迹杂交(Southern blot)是1975年由英国人southern创建,是研究DNA图谱的基本技术,在遗传病诊断、DNA图谱分析及PCR产物分析等方面有重要价值。
  二、基本原理
  Southern印迹杂交是先将DNA样品(含不同大小的DNA片段)先按片段长短进行分离,然后进行杂交。这样可确定杂交靶分子的大小些足行图据命气维赶于亮。因此,制备DNA样品后需令种金鸡助克差怀友要进行电泳分离。在恒定电压下,将DNA样品放在0.8~1.0%琼脂糖凝胶中进行电泳,标准的琼脂糖凝胶电穿菜到路泳可分辨70-80000bp的DNA片段,故可对DNA片段进行分离将毫二需字物唱察岁报。但需要用不同的胶浓度来分辨这个范围内的不同的DNA片段。原则是分辨大片段的DNA需要用浓度较低的胶,分辨小片段的DNA则需要浓度较高的胶。经过一段时间电泳后,DNA按分子量大小在凝胶中亮父云服亮自交害形成许多条带,大小相同的分子处于同一条带位置。另外为了便于测定待测DNA分子量的大小或是所处的分子武国植要作显加于支大小范围,往往同时在样品邻近的泳道中加入已知分子量的DNA样品即标准分子量DNA (DNA marker)进行电泳。DNA marker可以用放射性核素进行末端标记,通过这种方式,杂交后的标准分子儿影确其鲜量DNA也能显影出条带。
  三额顾、主要应用
  1.遗传病诊断
  2.DNA图谱分析
  3.检测样品中的DNA及其含量
  4.PCR产物分析

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