生药中氨基酸,肽类及蛋白质类常用检查方法有哪些

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①.氨基酸:
  a.分光光度法:只有络氨酸和苯丙氨酸对紫外线有吸收,氨基酸与衍生物反 应生成有色物质,常用的衍生物是:茚三酮、乙酰丙酮-甲醛。
  b.气象色谱法:将氨基酸衍 生为易气化的物质,利用气态样品中各组成在两相中的分配系数不同进行分析,常用的有硅 烷化、酯化、酰化等方法。
  c.液相色谱法。
  ②.肽链:
  a.N-末端降解法。
  b.高效液相色谱法。
  c.毛细管电泳技术。
  d.C-末端酶解法。
  ③.蛋白质:
  a.凯氏定氮法:样品与浓硫酸共热,有机物则分解产生NH 3 ,与H 2 SO 4 作用产生 (NH 4 ) 2 SO 4 。经强碱碱化后,分解释放NH 3 蒸到溶液中,计算其含量。
  b.双缩脲法: (NH 4 ) 2 SO 4·Tris 缓冲液,在强碱溶液中,双缩脲与 CuSO 4 形成络合物。
  c.Tolin 酚法:与双 缩脲原理相似。
d.考马斯亮蓝反应:蛋白质与染料结合测定吸光值。

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