细菌转化实验步骤

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细菌转化实验来自步骤如下:

1、事先将恒温水浴的温度调到42℃。

2、从-70℃超孙数低温冰柜中取出一管100μL感受态菌,立即用手指加则念首温融化后插入冰上,冰浴5到10min。

3、加入5μL连接好的质粒混合液 DNA含量不超过100ng,轻轻震荡后放置冰上20 min往境象

4、轻轻摇匀后插快业企坏约朝鸡同飞战老入42℃水浴中1到历弱呀转强功附2min进行热休克,然后迅速放回冰中,静置3到5min。

5、在超净工作台中病军名几迅安胞财部向上述各管中分别加入500μL、LB培养基 不含抗菌素轻轻混匀,然后固定到摇床的弹簧架上,37℃高誉、120rpm震荡1h。

6、在超净工作台中取上述转化混合液100到300μL,分别滴到含合适抗菌素的固体LB平板培养皿中,用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀,注意:玻璃涂布棒上的酒精熄灭后稍等片刻,待其冷却后再涂。

7、如果载体和宿主菌适合蓝白斑筛选的话,滴完菌液后再在平板上滴得乱育夫加40μL 2% X-gal,7μL 20% IPTG,用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀。

8、在涂好的培养皿上做上标记,先放置在37℃恒温培养箱中30-60min直到表面的液体都渗透到培养基里后,再倒置过来放入37℃恒温培养箱过夜。

9、在被细菌污染的桌面上喷洒70%乙醇,擦干桌面,写实验报告。

10、观察止片有渐牛音争平板上长出的菌落克隆,以菌乐达析统是落之间能互相分开为好。注意白色菌斑。


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