求助成骨细胞分化ALP染色活性鉴定问题

来自目的：通过观察植物360问答雌激素α玉米赤霉醇（α-ZAL）对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞的作用，研究植物雌激素α-玉米赤霉醇对大鼠成骨细胞增殖、分化及蛋白表达的影响，探讨植物雌激素α-玉米赤霉醇在骨代谢中的作用机理，以期为骨质疏松防治药物的研究开阔思路。　　 方法：1.采用二次酶消化法分离培养新生（24h）SD 乳鼠颅盖骨成骨细胞。2.应用钙能划溶举粮础钴法碱性磷酸酶(ALP)染药划价张员色和茜素红矿化结节染色来鉴定成骨细胞。3.应用噻唑兰(MTT)法测定植物雌激素α-玉米赤霉醇对成骨细胞增殖的影响。4.采用对硝基苯二钠基质动力学法检测了24 h和48h 成骨细胞碱性磷酸酶活性的改变。5.采用免疫组化法观察α玉米赤霉醇对体外培养成骨细胞的Bax、Bcl-2表达的影响。　　 结果：1.细胞形态学观察：刚接种的原代成骨细胞呈球形，2离兰煤4h内存活细胞已练磁居既还沉降贴壁，培养第2天能够完全展开，呈三角形、梭形，核明显增轴往无意强大；传代培养5天，细胞鸡京怕形态可见多样化，胞浆丰富，向外伸展，伸出拉缺青范久村希差罪如多个伪足，与周围细胞般云必还编不记的伪足相互连结，细胞半融合；培养一周左右，可见长索形、多角形、条索形，汇合时细胞呈铺路石状，可重叠生长。2.成骨细胞的鉴定：ALP 染色可见90％细胞染色阳性,胞质中出现灰黑色颗粒或块状沉积，矿化结节呈橘红色结节、边界清北字脱吗英晰，可证明为成骨细胞。3.对大鼠成骨细胞增殖的影响：大鼠成骨细胞在含有不同浓度（10-5mol/L～10-10热黑沿束设拉冲微风mol/L）α玉米赤霉醇以及含有10-10mol/L的雌二醇和无药物的培养基中培养24h后，与E2组比较，α-ZAl10-7mol/即月L、α-ZAl10-10mol/L 这两种浓度差星映克异无显著性（P＞0.05），说明这两种浓度有促进成骨细胞增殖的作用4.对硫敌语武大鼠成骨细胞外碱性整河景去粒脚就背角磷酸酶活性的影响：与正常组比较，三组均有显著性差异真值调，与E2组比较，α-ZAl10-7mol/L、α-ZAl10-10mol/L 这两种浓度差异无显著性（P＞0.05），说明这两种浓度均可以促进成骨细胞分泌ALP。在促进成骨细胞分泌ALP的过程中，随着用药天数的增加，ALP 含量也增加。5. Α-ZAL对Bcl-2，Bax蛋白表达分析的影响：α-ZAL（10-7mol/L）组、α-ZAL（10-10mol/L）组抑制成骨细胞凋亡的作用。 结论：1.一定浓度的α-玉米赤霉醇可以促进成骨细胞的增殖分化，说明它们对骨都具有雌激素样活性。2.Bax/Bcl-2 参与成骨细胞的凋亡过程,一定浓度的α-玉米赤霉醇可以通过调节Bax/Bcl-2 起到关键调控作用。