大体分为一下几步： 1.设计目的片段引物（含限制性酶切位点，要求：表达载体上有而目的片段上没有的酶切位点） 2.PCR扩增片段 3.扩增后的片段与pMD18/19T克隆载体连接，通过蓝白斑筛来自选，提质粒并酶切鉴定；将正确连接的克隆载体重组质粒酶切，回收目的片段 360问答4.目的片段与表达载体连接 5.转化到DH5a等克隆菌株，通过抗生素筛选，鉴定表达重组质粒。 作苗清少热黑肥角土历而6.测序检测 7.正确的表达重组质粒再转到表达菌株 8.表达
