蛋白质浓度测定方法:UV法,BCA法,考马斯亮蓝法等。
1、UV法。
这种方法是在280nm波长,直接测试蛋白。选择Warburg 公式,光度计可以360问答直接显示出样品的浓度,或者是选择相应的换算方法,将吸光值转换为样品浓度。蛋白质测定过程非常简单,先测试空白液,然后直接测试蛋白 质。从而显得结果很不稳定。
蛋白质没何举群介直接定量方法,适合测试混货映息打历较纯净、成分相对单一的蛋白质。紫外直接定量法相对于比色法来说,速度快,操材控果养侵迅均准作简单;但是容易受 到平行物质的干扰,如DNA的干扰;另外敏准光比庆明主使林个英煤感度低,要求蛋白的浓度较高所简坐器领急达渐。
2、BCA法。
原理BCA(bicinch底液便异己队转onininc acid)与二价铜离子的硫酸铜等其他试剂组成的试剂混合一起即成为苹果绿,即 BCA 工证部计几作试剂。在碱性条件下,B半溶轻顾量候显哪取控但CA 与蛋白质结合时,蛋白质将 Cu2+ 还原为 Cu+,头直材环距践航回易称工作试剂由原来的苹果绿色变为紫色复合物。
刑身562nm下滑闷其光吸收强度与蛋白质浓度成正比。BioVision的BCA院测的慢干但蛋白检测试剂盒提供了一种简单快速并且耐去污剂(大于5%)的手段检测溶液中蛋白质浓度。
3圆准应探啊航东及跳空、考马斯亮蓝法。
考马斯亮蓝 (Coomassie Brilliant Blue) 法测定蛋白质浓度,是利用蛋白质―染料结合的原理,定量测定微量磁器盾乱社呀常树蛋白浓度快速、灵敏的方法。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点,因而正在得到广泛的应用。目前,这一信吵弯方法是也灵敏度最高的蛋白质测定法之一。
考马碰桐斯亮蓝G-250职侵远染料,在酸性溶液中与领农蛋白质结合,使染料的最大吸收峰 (lmax) 的位置有田军系限染哥理该,由465nm变为595nm,溶液的颜色也由棕黑色变为蓝色。通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。研究发现,染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸(特别是精氨酸)和芳香族氨基酸残基相结合。