IHC(石蜡历始尽员机固春切片)都有哪些步骤
一、 石蜡组带财染刘屋土波左载刻织切片制作
固定:使组织样本尽量保持其离体前状态,多采用4%多聚甲醛固定液。
脱水:水和透明剂不能互溶,只有脱去水分后,才能让透明剂进入。使用梯度乙醇进行脱水。75%命采很画、85%、95%、100%、100%乙醇,每步1h-2h左右。
透明:乙醇不能与石蜡相溶,还需用能与乙醇和石蜡相溶的媒浸液,替换出组织内的乙醇。二甲苯是常用的透明剂,可以很好地与石蜡互溶。将组织依次放入二甲苯与无水乙醇的等体积混合液、纯二甲苯和纯二甲苯中进行透明。
浸蜡与包埋:用石蜡取代透明剂,纸无田触日客使石蜡浸入组织而起支持作用,便于在切片机上夹持地输切片。用于包埋石蜡的熔点在50~60℃之间。
切片:将包埋组织的蜡迅块固定在切片机上,切片厚度一般为4~8μM。
贴片:把耐领于计利司论么行积鸡切片放入50℃水中,摊平后用多聚赖氨酸处理过的载玻片捞起,室温晾干。