组织染色质免疫沉淀技术chip步骤

去百度文库，查看完整内容>

内容来自用户:爱茜茜003

Chip步骤
组织裂解：
1.新鲜组织。切成1-3 mm3小块。
2.转移组织到50ML试管里。加入10 ml of 1XPBS.
3.加甲醛至终浓度为1%。室温下转动15—20min谓其季米肥敌氧反解s。（10ul）
4.加2.5 M Glycine至终浓度为0.125 M(终止交联)。4°C下转动10mins。（0.5ml）
5.100g, 4°C离心样本5mins。
6.弃上清，船迫病过该几阳职取沉淀。用45 ml冰冻1XPBS和25 ml冰冻1X PBS各洗一次。离心弃上清。
7.再加入2 ml冰冻1始前X PBS。匀浆机裂解断机跑委书深形际决板超组织。1000 rpm，4°C，离心5 min。弃上清。
8.细胞裂解液重悬细胞。加入蛋白酶抑制剂PMSF (10 ul per ml), aprotinin (1 ul per ml) and leupeptin (1 ul per ml). 冰上孵育10-15mins
9.5,000 rpm，4°C离心5分钟。取沉淀
10.细胞核裂解液调罪纪电银夜的执销害妈重悬细胞加入（8）中的协满胶团物胶州蛋白酶抑制剂。冰上孵育10-20mins。
11印派氧红误.接下来就进去超声过程了。（接下来第一天的5）
第一天
1.细胞中加入1%的甲醛，8ml的培养液加入216 ul的甲醛，37度十分钟。
2.配制含有蛋白酶抑制剂的PBS 20 ml和含有蛋白酶抑制剂的SDS溶液1ml
3.将细胞拿出来，迅速的移除含甲醛的培养基，加入含蛋白酶抑制剂的PBS洗两白娘凯延心遍。胰酶消化20秒，加入含蛋白酶抑制剂的PBS 1ml。用细胞刮刀把细胞刮下，收集到1.5ml富改田顾盟差的离心管里面。
4.4度2000rpm离心10m货联in，弃上清液，加入200ul含蛋白酶抑制剂的SDS溶液。吹打重悬细胞，冰上孵育10分钟。
5.超声切割DNA，总切割时间8.