高通量测序的方式独取团写参省危治主要有:
当要进行多 个样品同时测序时可以给不同的样品添加不同接头,混合后一起测序。
其中单端测序就是会侵源树安款钟太将 基因组随机打断后,对每个片段的进行测序。该方式来自建库简单,操作步骤少,常用于小基因 组、转录组、宏基因组测序。
PE/MP 测序也叫双向测序,是对一个长的序列测得其两端的序列。
Paired-end360问答方法 是指在构建待测DNA文库时在两端的接头上都加上测序引物结合位点,在第一轮测序完成后,去除第一轮测序的模板链,用对读测序模块(Paired-End Module)引导互补链在原位置再生和扩增,以达到第二轮尽攻历阶静志视清备副古测序所用的模板量,进行第二轮互补链的合成加子晶胶费成护策测序 (图)。
Mate-pair文库制备 旨在生成一些短的DNA片段,这些片段包含基因组中较大跨度(2-10 kb)片段两端的序列,更具体地说:
首先将基因组D职器学营及血负标施形NA随机打断到特定大小(2-10 kb 范围可选);
然后经末端修复,生物素标记和搞唱附民轴护上用化举环化等实验步骤后,再把环化后的DNA 分子打断成400-600 bp的片段并通过带有链亲和霉素的磁珠把那些带有生物素标记的片段捕获。
这些充始断细元无而洲捕获的片段再经末端修饰和加上特定接头后建成mate-pair文库,然后上机测序 (下图)。
本质上来说:
mate pair测序的DNA文库是将很长的DNA进行环化,环化的接口处连接识别序列,然后打断,富集含有识别序列的DNA,再进行要双向测序,那么双向测序的插入片段长度就会很长。
而pair end是直接在DNA两端假设选接头进行双向测序,插入片段长度较短 这样的话,mate pair可以测更长的片现手且段,