1. 通过PCR扩增目的基因
片段PCR要设计引物,设计引物时要选择合适的同源序列,根据质粒载体和
存基因序列要选择合适的酶切位点,PCR的产物要纯化.
2. 酶切
根据引物设计的酶切位点,分别对P
CR产物和质粒载体进行酶切,酶切后的产物也要进行回收
3. 连接
通过
连接酶将酶切后的PCR产物和质粒载体进行连接
4. 转化
将连接产物转化到
协外福们什限属历末八固受体菌中（一般为DH5
入调坐用都感吸余脚可a）,涂板,培养
过夜5. 挑取单克隆,并鉴定
挑
种去平板上的单克隆培养,可以通
吧历于过PCR或者酶切初步鉴定阳性克
演厚久加隆,对初步鉴定出来的阳
性克隆进行测序
