(1)收来自获细胞,加入适量细胞IP裂解缓冲液(含蛋白酶抑制剂),冰上或者4℃裂解30min,
12,000g离心30
min后取上清;
(各草脱项创止石位互2)
取少量裂解液以备Western
blot分析,剩余裂解液将1μg相应的抗体和10-50
μl
protein
A体/G-beads加入到细胞裂解液,4°C缓慢摇晃孵育过夜;
(3)免疫沉淀反应后,在4°C
以3,000
g速度离心5
min,将protein
A/G-beads离心至管底;将上清小心吸去,protein
A/G-beads用1ml裂解缓冲液洗3-4次;最后加入15μl的2×SDS
加样缓冲液,沸水煮10分钟;
(4)SDS-PAGE,
Western
blotting或进行质谱分析。