细菌耐药基因能作为特异性检测该细菌吗

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朋友你好,根据你的描述,细菌产生耐药性的原因很多,主要分为产生灭活酶、抗菌药物作用靶位改变、改变细菌外膜通透性、影响主动泵出系统、影响细菌被膜的形成及交叉耐药性等六方面。部分细菌体内含有产头孢菌素酶(AmpC酶)类的耐药基因,它可存在于染色体上,亦可由质粒介导,通过产生AmpC酶使抗生素内β-内酰胺环的酰胺键断裂,从而使该类抗生素水解失活。目前关于对细菌耐药性的检测主要有以下几种方法:细菌耐药表型的检测(包括耐药筛选试验、折点敏感试验及药敏试验的仪器化和自动化等),β-内酰胺酶检测,特殊耐药菌检测和耐药基因检测等。其中最为直观的检测方法是以体外培养的药物检测,但仍存在培养时间长等缺陷。随着耐药机理的研究逐步深入,分子生物学方法检测细菌耐药逐渐被临床接受。常见检测细菌耐药基因的方法主要有:聚合酶链式反应(PCR)、PCR-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)、PCR-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)、生物芯片技术(gene chip)、自动DNA测序(DNA sequencing)等。传统的基因鉴定方法为PCR法和DNA测序法,其中传统的PCR法检测周期较长,通常需要3-4个小时;SangerDNA测序法对引物特异性要求较高,且价格较昂贵,后期数据分析较复杂,不适合临床推广使用。近年新发展起来的核酸等温扩增技术,无论是在反应时间还是仪器要求方面,都比PCR技术更有优势。在这些众多等温扩增技术中,又以环介导等温扩增(LAMP)的应用最为成熟、最为广泛,其高灵敏度、高特异性、快速的扩增得到了市场的检验和认可。PCR(聚合酶链式反应)是利用DNA在体外95℃的高温时变性成单链,在60℃左右的低温时,引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶最适宜的72℃反应温度,DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链,基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备,能在变性温度、复性温度和延伸温度之间很好地进行控制;聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,能够看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点是能将微量的DNA大幅增加,本发明旨在通过实时荧光定量PCR核酸检测技术,开发一种特异性引物检测鼠源性成分的方法,为鼠源性成分的检测提供技术支持,为标准方法的建立提供实验支撑,为打击肉类掺假提供有力的科学依据,具有良好的社会和应用前景。



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