strep标签蛋白大小

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1.06kDa。

Strep-tag®系统是一种允许通过亲和层析纯化和检测蛋白质的方法。的Strep-标签II是一种合成的肽由八个氨基酸(色氨酸-丝氨酸-他-临-谷氨酰胺-苯丙氨酸-谷氨酸-赖氨酸)。

该肽序列对 Strep-Tactin®(一种特殊工程化的链霉亲和素)表现出内在亲和力,并且可以在 N 端或 C 端与重组蛋白融合。通过利用高度特异性的相互作用,Strep-标记的蛋白质可以一步从粗细胞裂解物中分离出来。由于Strep标签在温和的生理条件下洗脱,因此特别适用于产生功能性蛋白质。

原理:

就像其他短亲和标签(His-tag、FLAG-tag)一样,Strep-tag在其cDNA或基因的亚克隆过程中可以很容易地与重组蛋白融合。可用于各种宿主生物(大肠杆菌、酵母、昆虫和哺乳动物细胞)的各种载体的表达。 

Strep-tag 的一个特殊好处是它的尺寸相当小,而且它在生化方面几乎是惰性的. 因此,蛋白质折叠或分泌不受影响,通常不会干扰蛋白质功能。

Strep-tag 特别适用于功能蛋白的分析,因为纯化过程可以保持在生理条件下。这不仅允许在天然状态下分离敏感蛋白质,而且还可以纯化完整的蛋白质复合物,即使只有一个亚基携带标签。

1、在 Strep-tag 纯化循环的第一步中,将含有 Strep-tag 融合蛋白的细胞裂解物施加到带有固定化 Strep-Tactin 的柱子上。

2、在标记蛋白与 Strep-Tactin 特异性结合后,用生理缓冲液(例如 PBS)进行短时间洗涤即可去除所有其他宿主蛋白。这是由于其非特异性结合蛋白质的趋势非常低。

3、然后,纯化的 Strep-tag 融合蛋白用低浓度的脱硫生物素轻轻洗脱,它专门竞争生物素结合口袋。

为了再生色谱柱,通过应用含有 HABA 的溶液(黄色偶氮染料)去除脱硫生物素)。脱硫生物素的去除通过颜色从橙黄色变为红色来表示(步骤 4+5)。最后,用少量运行缓冲液冲洗 HABA 溶液,从而使色谱柱准备好用于下一次纯化运行。

Strep-tag 应用

Strep-tag 系统提供了一种在生理条件下纯化蛋白质的高选择性工具。获得的蛋白质具有生物活性并显示出非常高的纯度(高于 95%)。

此外,Strep-tag 系统可用于各种分析中的蛋白质检测。根据实验情况,Strep-tag 抗体或Strep-Tactin,带有酶(例如辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶(AP))或荧光(例如绿色荧光蛋白(GFP))标记。

如果需要高纯度,可以首先使用 Strep-Tactin 纯化裂解物,然后使用抗 Strep-tag 的抗体进行第二次运行。这减少了非特异性结合蛋白的污染,这可能发生在一些罕见的情况下。


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