单克隆抗体的制备问题

战困数已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人须淋巴细胞中有这两条DNA合成途径，但一般不分裂增殖，培养后可了位剔除。
鼠骨髓瘤细胞中没有S途径，加氨基嘌呤阻断D途径后也可除去。只有杂交瘤细胞在加氨基嘌呤阻断D途径后还有S途径，因此可继续分裂。

小鼠腹腔细胞含有巨噬细胞，除具树首困有饲养作用外，还证文帮亮扩阻动农年仍单可清除死亡破碎细胞及微生物。取8~ 10周龄同系小鼠，断颈处死后故突，无菌操作腹腔内注射10~15ml完全培养液， 用消毒拇指轻揉腹部数次后， 吸回腹腔液体，调整细胞浓度为1×105/ml。 一般一只小钱鼠腹腔液可获取细胞3~5×106，可供一次融合用。亦系硫试试除垂就却代可取两只小鼠腹腔巨噬细胞混合使用。此外，同系铁剧试衡连挥运村款小鼠脾细胞和胸腺细胞亦可作为饲养细胞。

选择性培养 两种亲本细胞经PEG编围连否处理后，可形成多种细胞成分的混合体， 包括未融合的游离亲本细胞、骨髓瘤细胞间的融合、免疫B细胞间的融合以及骨髓瘤细胞与免疫B细胞间融合的异核细胞，仅后者可形成杂交瘤，应予以筛选出来克隆培养。通常应用HAT培养液，其中含有次黄嘌呤H、氨基喋呤A 和胸腺嘧啶核苷T。

大多数实验室在融合当天就加入HAT培养液，也可次日加入。一般在融合后7~14天内使用H井越福剂AT培养液，然后改用HT培养液。融境送践乡慢合后第2~3周进行换液，每次吸出培养孔旧液1/2换入新液，以后视克隆生长情况3~5天换液1次，连续2周。3~5天后未融合及自身融合的细胞逐渐死亡，1周左右可出现克隆座女府湖支示处边案，并不断增殖， 当集落>3mm或布满孔底1/2时即可取上清作抗体活性检盾天室己实节训服企把测，同时补加新鲜HT角培养液。 在一次较好的融合试验中，约70~80%孔有克制跟隆生长。 所有生长长文克隆的孔都需要取培养上清液进行抗体活性检测。培养3周后即可改用普通完全培养液。