我用FUGW质粒直接转染肺癌株DH3,荧光显微镜下观察,转染效率大约30%左右,有进一步提高的潜力吗?如果我的目的是下调某个miRNA的表达量,能否用qRT-PCR检测出下调的幅度?
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回答者:网友
应该还有优化的潜力的,我不知道你用的什么转染试剂。转染效率本身和你用的转染试剂有很大的关系,建议你先找来集中不同的转染试剂,用VenusC1或者是VenusN1作报告质粒,找到最适合你的细胞的试剂,然后在用这个试剂,按照不同的DNA和转染试剂的比值来优化。我们在转染细胞之前一般是检测8种不同的转染试剂,找到效率最高的那一种,然后再进一步优化。
至于用qPCR,你的这个miRNA如果是细胞内源的,那就没有问题