激酶实验:
进行JAK1, JAK2, 和JAK3 激酶实验，使用在杆状病毒感染的 SF9细胞中表达的蛋白(GST 和人类JAK酶催化结构域的融合蛋白)，通过亲和层析在谷胱甘肽-琼脂糖凝胶中纯化。反应底物是聚谷氨酸-酪氨酸 [PGT (4:1)], 按100 μg/mL包被到Nunc Maxi Sorp板上，在 37oC下过夜。然后冲洗板三次, 在每孔中加入JAK 酶，孔中含100 μL激酶buffer(50 mM HEPES, pH 7.3, 125 mM NaCl, 24 mM MgCl2) + ATP + 1 mM 钒酸钠)。按不同剂量加入CP-690550，进行激酶实验。然后在室温下温育30分钟，再冲洗实验板三次。通过标准ELISA实验，使用 磷酸化抗体测定一个给定孔中的磷酸化的酪氨酸水平。
细胞试验:
HEL细胞, 从正常供着，两个PV病人体内获得的扩大红系祖细胞，和 FDCP-EpoR受体细胞(每组样本2 × 107 个细胞),使用浓度不断增高的 CP-690550处理, 然后在不同时间点收集。细胞制成颗粒，使用冷磷酸盐缓冲液冲洗三次，然后悬浮在300 µL裂解液中 ，再在冰上处理1小时。细胞裂解液按20 000g转速在 4oC下离心20分钟,取出上清液。在上清液中加入15 µL anti-JAK2 (处理细胞) 或 anti-JAK3 兔抗体(未处理细胞)，然后在冰上再处理1小时。最后, 在上清液中加入50 µL 蛋白A/G琼脂糖浆，然后在 4oC下不断旋转温育过夜。冲洗抗体-蛋白复合体三次, 再使用放射免疫沉淀法(RIPA) buffer冲洗一次,使用冲洗冲洗一次,最后使用50 mM Tris-HCl buffer pH 为7.5冲洗一次。通过 Western blotting 分析免疫沉淀复合物，使用磷酸酪氨酸抗体，除去，再使用anti-JAK2和anti-JAK3抗体做探针，来分析免疫沉淀复合物。
