怎样提取DNA

.DNA提取简介 研究DNA命代谢作用需要同物材料提取DNA.由于DNA物体内布及含量同要选择适材料提取DNA 植物牛胸腺۰物肝脏۰鱼类精植物种胚都含丰富DNA 微物谷氨酸菌体含7%~10%面包酵母含4%啤酒酵母含6%肠肝菌含9%~10% 各种材料提取DNA同离提取难易程度同 于低等物病毒提取DNA 比较容易数病毒DNA 量较提取易保持其结构完整性 细菌及高等植物提取DNA难度些细菌DNA 量较般达2×10 道尔顿易机械张力剪断细菌DNA除核DNA 外质粒DNA 等 1、核酸理化性质 RNA核苷酸纯品都呈白色粉末或结晶DNA则白色类似石棉纤维状物除肌苷酸、鸟苷酸具鲜味外核酸核苷酸都呈酸味 DNA、RNA核苷酸都极性化合物般都溶于水溶于乙醇、氯仿等机溶剂钠盐比游离酸易溶于水RNA钠盐水溶解度达40g/LDNA水10g/L呈黏性胶体溶液酸性溶液DNA、RNA易水解性或弱碱性溶液较稳定 状态DNA 脱氧核糖核蛋白(DNP)形式存于细胞核要细胞提取DNA 先DNP抽提再P除再除细胞糖RNA 及机离等离DNA DNPRNP盐溶液溶解度受盐浓度影响同DNP低浓度盐溶液几乎溶解0.14 mol/L氯化钠溶解度低仅水溶解度1%随着盐浓度增加溶解度增加至1mol/L氯化钠溶解度比纯水高2倍 RNP盐溶液溶解度受盐浓度影响较0.14mol/L氯化钠溶解度较提取用离两种核蛋白 2.细胞破碎 细菌坚硬细胞壁首先要破碎经胞 三种：①机械：超声波处理、研磨、匀浆；②化试剂：用SDS处理细胞； ③酶解：加入溶菌酶或蜗牛酶都使细胞壁破碎 由于高等物DNA 主要存于细胞核与线粒体所提取两困难（高等植物与类似）： ①破碎细胞难；处死物٠离组织器宫破碎细胞费期间DNA 能DN ase降解物组织：特别肌肉组织难破碎,即使较易破碎肝٠肾等组织往往使用组织匀浆器易造DNA 断裂 ②量般比细菌2—3数量级比病毒4—5数量同物材料要根据具体情况选择适离提取 3.DNA提取几种 (1).浓盐 利用RNPDNP电解溶液溶解度同二者离用用1M 氯 纳提取化钠抽提,DNP粘液与含少量辛醇 氯仿起摇荡,使乳化,再离除蛋白质,蛋白质凝胶停留水相及氯仿相间DNA位于层水相,用2倍体积95%乙醇DNA 钠盐沉淀. 用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除RNP,再1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇除蛋白. 两种比较,种使核酸降解能少些. 稀盐酸溶液提取DNA ,加入适量污剂,SDS助于蛋白质与DNA 离提取程抑制组织DNaseDNA 降解作用,氯化钠溶液加入柠檬酸钠作金属离烙合剂.通用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA. （2）.阴离污剂: 用SDS或二甲苯酸钠等污剂使蛋白质变性,直接物材料提取DNA .由于细胞DNA与蛋白质间借静电引力或配位键结合,阴离污剂能够破坏种价键,所用阴离污剂提取DNA. （3）.苯酚抽提: 苯酚作蛋白变性剂,同抑制DNase降解作用.用苯酚处理匀浆液,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白表面含极性基团与苯酚相似相溶蛋白溶于酚相DNA溶于水相离层取水层重复操作再合并含DNA 水相利用核酸溶于醇性质用乙醇沉淀DNA DNA十粘稠物质用玻璃漫漫绕团取特点使提取DNA保持状态 . （ 4）.水抽提: 利用核酸溶解于水性质,组织细胞破碎,用低盐溶液除RNA沉淀溶于水使DNA充溶解于水,离收集清液.清加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌搅.别用66% ٠80%95%乙醇及丙铜洗涤,空气干燥,既DNA品.提取DNA蛋白质含量较高,故般用.除蛋白加改良,提取程加入SDS.