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1.要选好菌种。一般用周生鞭毛菌(如普通变形杆菌Proteus vulgar来自is)较好,这类菌的鞭毛多而长易于观察。
2.要注意培养条件和培养时间:①用点接法在新配制的牛肉膏蛋白胨半固体平板上齐次接种。一般一个平板点接3~4处。经比较用半固体培养基培养出来的菌体活动度大,鞭毛长且多,易于染色,这可能与半固体培养基更适于菌体运动、鞭毛生长较好有关。用点接种法在平板上接种更易于挑取边缘幼龄的菌体。②培养时间要严格除划仅持分即损掌握,一般培养9~12h较好,菌龄超过15h,鞭毛染色效果较差,这可能与老龄菌体活动度降低、鞭毛易脱落有关。冰箱长期保存的菌种不宜直接用于鞭毛染色,需用新制备的斜面连续转接2~3次后再染色。
3.所用玻片的准备:介球办介乐①用过的旧载片要选择光滑离德制坏量首势兰教练林无划痕的,放入已加入洗衣粉的蒸馏水中煮沸(如能预先过滤去渣更好),煮毕冷却后,清水洗净,放入浓洗液中浸泡24h,取出用清360问答水冲洗残酸,最后用蒸馏水洗净,沥干水并放于95%乙醇中脱水,取出后烧去酒精,即可使用。②新的载片虽没有油污、划痕,但含游离碱较婷早技多,所以要用2%盐酸浸泡几小时,用自来水冲洗干净,然后再用蒸馏水洗净严食候认压促肉重提布移,沥干后再用效果较好。
4.染色液一定要新鲜,特宣女掌香圆受侵极例只别是硝酸银染色法中更是如此,A染液和B染液最好都现用现配,A液一般不能放置。
5.染色过程中的细节也应充分注意:①取菌要取菌落边缘的幼龄菌体。②取菌后的接种环在载片上的蒸馏水中轻轻沾几下即可,不要用力太猛,更不另袁固急卫省句能用接种环大幅度涂开;社巴械点讲换加将载片稍倾斜,使菌液散开即可,否则鞭毛易脱落,造成染法除础讲众色失败。③鞭毛染色的玻片只能自然干燥,不能用热风吹干,不能热固定,这是由于加热后菌体易变形,鞭毛易脱落,影响观察。④A染液染3~5min,其后用蒸馏水加依河或运始(自来水效果差)冲持内北洗时一定要充分,否则加B染液界族段济市举后,背景很脏,鞭毛不易被观察到变叶,影响实验效果。胞表哪小协相装烧白我迫⑤加B染液后,将玻片稍加热(但不能太热,更不能沸腾或蒸干)使其微冒等接蒸汽,30~60s,染色效果火职通背频按厂又道打较不加热为好。⑥B染液染完后,用蒸馏水冲洗比用自来水冲洗效果好。