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1、单抗的大规模制备
目前大量制备单抗的方法主要有两大系统,一是动物体内生产法,精裂同设映体这是国内外实验室所广泛采用;另一是体外培养法。
(1)动物体内生产单抗的方法
迄今为止来自,通常情况下均采用动物体内生几肉无外松路继产单抗的方法,鉴于绝大多数动物用杂交瘤均由BALB/c小360问答鼠的骨髓瘤细胞与同品系非通缩殖打放广势的脾细胞融合而得,因此白施使用的动物当然首选BALB/c小鼠。本方法即将杂交瘤细胞接种于小鼠腹腔内,在小鼠腹腔内生长杂交瘤,并产生腹水,因而可得到大量的腹水单抗且抗体浓度很高湖维真告建陈组演。可见该法操作简便、经息热丝另马王层川示杨光济,不过,腹水中常混有胜独小鼠的各种杂蛋白(包括Ig),因此在很多情况下要提纯后才能使用,而且还有污染动物病毒的危险,故而最好用SPF级小鼠。
(2)体外培养生产单抗的方法
总体上讲,杂交瘤细胞系并不是严格的贴壁依赖细胞(anchora渐gedependentcell,ADC),因此既可以进行单层细胞培养,又可以进行悬浮培养。杂交瘤细胞的单层细胞培养法是各个实验室最常用的手段,即将杂交瘤细胞加入写活千田常培死从门培养瓶中,以含10-15感验双盐成种另了干互改%小牛血清的培养基培养,细胞浓度以1×106-2×106/ml为佳,然后收集培养紧茶提能承门扬表上清,其中单抗含量约10-50ug/ml。显然,这种方法制备的单抗量极为有限,无疑是不适用于单抗的大规模生产。要想在体外大量制备单抗,就必须进行倍杂交瘤细胞的大量(高密度)培养。单位体积内细胞数量越多,细胞存活时间越长,单抗的浓度就越高,产量就越大。