农杆菌转化法?

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转化:目的基因插入Ti质粒的T-DNA上——进入农杆菌——导入植物细胞——色扩缩合化用甲全达元同目的基因整合到植物染色体的DNA上——目的基因得以稳定维持和表达

1、获取目的基因:用限制性核酸内切酶切割下目的基因。

2、基因表达载体的构建:将呢欢停比相目的基因与载体(大多数选用质粒)用DNA连接酶连接起来。

3、将目的基因导入受体细胞:将含目的基因的重组质粒导苏广机入农杆菌(农杆菌为受体细胞)

4、目的基因的检测与鉴定:用DNA分子杂交技术/分子杂交技术/抗原-抗体杂交/个体生物学水平鉴定(这个方法需要导入重组后的细胞的植物体,详见第五步) 几种方法进行检验(根据要求选取不同方法)。

5、最后将成功表达的细胞导眼庆益远使呼洋聚入植物体内,对植物体进行个体生物学水平鉴定。

整个转基因体系的建立步骤大致可以归纳为:目的载体的构建---载体的农杆菌转化---农杆者又举示除衣目移术有菌与植株共培养---转化植株配元车抓她夜宗探周露的筛选---转化植株的鉴定。

在每一步中都涉及到很多的方法与技术。目的载体的构建,包括目的基因的克隆、载体的酶切、连接(用限制性核酸内切酶与DNA连接酶),以及测序分析。载体的农杆菌转化,目前有很成熟派质时误件个走集井的方法,试验中应注意热激和冷激速商结迫究的时间。农杆菌与植株的共能此基则断培养,即为植株转化实验,在溶液中加入促进植株愈伤生长的激素能一定程度提高转化率。转虽操模省动量化植株的筛选,大多是利用抗生素进行筛选的,抗生素的选择则需根据目的载体确定,设置不同梯度的抗生素对植株进行筛选。转化植株的鉴定,一般采宗织织延夫它双鱼史用PCR法。以上所有的操作,都应该在无菌环境下进行,无菌是植物组培的一项基本,但是重要的要素。


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