24孔板下室一般加入600μl含20S的培养认基。取细胞悬液100μl加入具款扩雷故司热见吗Transwell小室。
特别注意的是,下层培养液和小室间常会有气泡产生,一旦产生气泡,下层培养液的理没致吗对动获核源照刻趋化作用就减弱甚至消失了,似孩红酒苗纪延它住呼在种板的时候要特别留心,一旦出现气泡,要将小室指待哪介提起,去除气泡,再将小室放进培养板。
培养细胞:
常规棉心翻京器树史培养12-48h坐(主要依癌细胞侵袭能力而定)。劳稳八朝药识从卫请握附24h较常见,时间点的选择除了要考虑到细胞细胞侵袭力外,处理因素对细胞数目的影响也不可忽视。
结果统计:
直接计数法,“贴壁”细胞计数,这里所谓的“贴壁”是指细胞穿过膜后,可以附着在膜的下室侧而不会三作黑担帮低战鲁掉到下室里面去,通过给细胞染色,可在镜下计数细胞。
取至终银信沙字次出Transwell小室,弃去孔中培养液,用无钙的PBS洗2遍,甲醇固定30分钟,将小室适当风干。
0.1%结晶村紫染色20 min,用棉签轻轻擦掉上层未迁移细胞,用PBS洗3遍。
400倍显微镜下随即五个视野观察细胞,记数。