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开展无菌检查及微生物限度检查工作，首先要按照《药品检验所实验室质量管理规范》及《药品生产质量管理规范》的要求，建立一个布局合理、使用方便、操作安全的无菌室，并且配有完善的实验设施和管理制度。无菌检查、微生物限度检查以及接种室（接种对照菌、菌种传代）均应严格分开，具有危险性的毒株、毒素如破伤风梭菌、黄曲霉毒素的实验室需单独使用，以便控制防止传播。 一、洁净室的布局1、根据样品检验要求，一般应至少包括更衣缓冲系统、微生物限度检查室、无菌检查室、阳性菌室和物流通道。2、更衣系统应至少包括一更（含更鞋）、二更（含洗手）、缓冲以及人流走廊等。3、物流通道应考虑净污分流的布局，有条件的可设置污物走廊 二、结构与要求： 无菌洁净室不宜设在底层，防潮、防霉、采光好，远离交通干道，厕所及污染区，面积不超过10m2，高度不超过2.4m，由两个缓冲间、操作间组成。操作间缓冲间之间应有样品传递窗，出入操作间和缓冲间的门不应直对。无菌室内应六面光滑平整，无缝隙，不起灰，不落尘，耐腐蚀，易清洗，墙壁与地面、墙壁与天花板连接处应呈凹弧形，操作间不得安装下水道。 无菌室内的照明灯应嵌装在天花板内，采光面积要大，光照应分布均匀，光照度不低于300勒克斯。缓冲间和操作间应装有紫外线杀菌灯（2－25w/m3）''用于空气消毒。紫外线波长200－300nm者具有杀菌作用，其中以265－266nm杀菌作用最强，这与DNA的吸收光谱范围一致，其杀菌机理可能是在细菌细胞DNA中引起胸腺嘧啶双聚体形成，从而干扰细菌细胞DNA复制，导致细菌变异死亡。紫外线杀菌灯1m以内距离杀菌效果最佳，每次开灯照射时间为30min。应定期检查紫外线灯辐射强度，不得低于70μW·cm-21m距离。其缺点是穿透力弱，一张纸板可以阻碍光的透过，不能穿透固体物，故只能用作表面消毒及一些不耐热或化学消毒剂物品的消毒。三、温度、湿度 无菌室内温度和相对湿度直接影响紫外杀菌灯的杀菌效果，故温度最好控制在25±2℃，相对湿度40－60％。操作间或净化工作台的洁净空气应保持对环境形成正压，不低于49Pa。 四、操作间无菌室内应安装空气除菌过滤层流装置及调温装置。洁净度要求：净化工作台洁净度为100级，无菌室应为10000级。操作间应准备乙醇灯（或煤气灯），火柴，2％碘酊棉球及75％乙醇棉球、试管架、大小橡皮乳头、砂轮、记号笔、无菌剪刀、镊子、注射器等。微生物限度检查无菌室操作间内还应有电子称（感觉为0.1g，最大称量为300g为宜），电动匀浆仪等。 五、洁净室的清洁维护1.洁净室的清洁维护分为日常维护、定期维护和不符合时的维护。2.日常维护由每次实验的实验人员进行，维护的范围为进行实验的洁净工作室和辅助洁净区，维护的频率为每次实验后。3.定期维护由实验室指定专人进行，维护的范围为所有洁净工作室，维护的频率为每二周一次。4.不符合时的维护由实验人员进行，维护的范围为所有不符合的洁净室，维护的时机为出现不符合时 六、洁净室的验证验证的项目：洁净度、微生物数、换气次数、静压差、照度、温度、相对湿度 验证的方法：洁净度和微生物数：采用GB/T16292~16294-1996，其他项目：参照JGJ71－90七、无菌操作要求：1.无菌室应每次使用前后用0.1%苯扎溴铵溶液或2％甲醛液擦拭工作台面及可能污染的死角，湿拖地面，打开无菌空气过滤器及超净工作台的开关30分钟，紫外线杀菌灯照射1小时。2.操作人员用肥皂洗手后进入缓冲间换拖鞋，用75％乙醇棉球擦手，穿戴工作衣帽、口罩。将所需物品剥去牛皮纸及外包装，从传递窗移入操作间，再用0.1%苯扎溴铵溶液泡手后进入操作间，在乙醇（或煤气灯）火焰区（火焰高度3－5cm）操作。3供试品表面消毒，如为安瓿先用砂轮划痕后用2％碘酒棉球擦拭，再用75％乙醇棉球擦拭、待干，也可以用消毒液浸泡消毒。4操作者勿用嘴直接吸吹吸管，防止致病菌感染操作人员及口中的杂菌污染供试品。5在无菌操作中切勿大幅度或快速动作、拖行，以免搅动空气中尘埃微粒。6注射器如需回抽时，应对着火焰吸入无菌空气。7所用的器材如培养基、稀释剂配制后经湿热灭菌121℃30分钟，吸管培养皿等均应洗涤，干燥，包扎后经干热灭菌160℃2小时才能使用。八、消毒剂安全使用原则根据消毒剂使用区域和对象的不同，将消毒剂分成3类，分别是：第一类消毒剂，专用于普通实验区，仅用于物品外表面的消毒，常用的有聚维酮碘和石炭酸等；第二类消毒剂，专用于洁净室的更衣室，仅用于佩戴手套的双手消毒，常用的有苯扎溴铵和75％乙醇；第三类消毒剂，专用于无菌操作间，直接用于消毒直接接触药品的容器表面，也用于实验操作过程中的手部消毒和实验台面消毒，常用的有聚维酮碘溶液和75％乙醇。九、环境监控的评价指标（表面微生物数）1、需氧嗜温菌小于5cfu/cm2，合格2、需氧嗜温菌在5～25cfu/cm2之间，需进一步调查3、需氧嗜温菌大于25cfu/cm2，不合格，应立即消毒处理十、空气微生物数沉降菌大于15cfu/板，应暂停工作，进行消毒
