蛋白还原烷基化及酶解试剂添加顺序先加双缩脲A两毫升，再加 3.4 滴双缩脲B。
具有两个或两个以上肽键的化合物在碱性条件下与cu2+反应，生成红紫色的络合物，所有的蛋白质均有此显色反应。
蛋白还原原理：
一价铜离子和独特的BCA溶液A（含有BCA）相互作用产生敏感的颜色反应。两分子的BCA螯合一个铜离子，形成紫色的反应复合物。该水溶性的复合物在562nm处显示强烈的吸光性，吸光度和蛋白浓度在广泛范围内有良好的线性关系，并于标准曲线对比，因此根据吸光值可以推算出蛋白浓度。
