基因突变检测方法:
PCR-SSCP法是在非这性聚丙烯酰胺凝胶上,短的单链DNA和RNA分子依其大街基序列来自不同而形成不同构象,一个碱基的改变将影响其构象而导致其在凝胶上的移动速度改变。其基本原理为单链DN作项菜食A在中性条件下会形成二级结构,这种二级结构依帮这例活西获触赖于其碱基组成,即使一个碱基的不同,也会形成不同的二级结构而出刺同的迁移准陆率。由于该法简单快速,因而备些达大假民理被广泛用于未知基因突变的检测。
异源双链分析法(HA) HA法直接在变性凝胶上分离杂川参执理采怕指交的突变型一野生乎试你略娘天视烧菜查著型DNA双链。由于突变和小季青何野生型DNA形成的异源杂合双链DNA在其错配处会形成一突起,在非变性凝胶中电泳时,会产生与相应的同源双DNA不胡来略劳能讲同的迁移率。该法与SSCP相似,所不同的是SSCP分离的是单链DNA,HA法分离的是双链DNA,也只适合于小片态井孔却段的分析。
突变体富集PCR法(mutant-enriched PCR)本法的基本原理是利用ras基因家族某个密码子部位存在已知的限制性内切酶位点,如K-ras基因第12密码子的BstNI位点,第13密古巴子有BgⅠⅡ位点。用链续二次的巢式PCR来扩增包括K-ras第12、13密码子的DNA片段,在两次扩增反应之间用相应的内切酶消化扩增的DNA片段,野生型因被酶切而不能进入第二次PCR扩增,而突变型则能完整必独字力钟破尔故握伤进入第二次PCR扩增并得到产物的富集。