植物组织提取基因组DNA 一、材料 幼嫩叶子。 二、设备 移液器，冷冻高速离心机，台式高速离心机，水浴锅，陶瓷研钵，50ml离心管（有盖）及5ml和1.5ml离心管，弯成钩状的小玻棒。 三、试剂 1、提取缓冲液Ⅰ：100mmol/L Tris·Cl, pH8.0, 20mmol/L EDTA, 500mmol/L NaCl, 1.5% SDS。 2、提取缓冲液Ⅱ：18.6g葡萄糖，6.9g二乙基二硫代碳酸钠，6.0gPVP，240ul巯基乙醇，加水至300ml。 3、80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇 4、 RnaseA母液 5、其它试剂：液氮、异丙醇、TE缓冲液，无水乙醇、70%乙醇、3mol/L NaAc。 四、操作步骤： 1. 在50ml离心管中加入20ml提取缓冲液Ⅰ, 60℃水浴预热。 2. 幼苗或叶子5-10g, 剪碎, 在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热的离心管中, 剧烈摇动混匀, 60℃水浴保温30-60分钟(时间长,DNA产量高), 不时摇动。 3. 加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液, 颠倒混匀(需带手套, 防止损伤皮肤)，室温下静置5-10分钟, 使水相和有机相分层(必要时可重新混匀)。 4. 室温下5000rpm离心5分钟。 5. 仔细移取上清液至另一50ml离心管,加入1倍体积异丙醇,混匀,室温放置片刻即出现絮状DNA沉淀。 6. 在1.5ml eppendorf中加入1ml TE。用钩状玻璃棒捞出DNA絮团,在干净吸水纸上吸干,转入含TE的离心管中,DNA很快溶解于TE。 7. 如DNA不形成絮状沉淀,则可用5000rpm离心5分钟, 再将沉淀移入TE管中。这样收集的沉淀,往往难溶解于TE,可在60℃水浴放置15分钟以上，以帮助溶解。 8. 将DNA溶液3000rpm离心5分钟, 上清液倒入干净的5ml离心管。 9. 加入5μl RNaseA(10μg/μl), 37℃ 10分钟, 除去RNA(RNA对DNA的操作、分析一般无影响，可省略该步骤）。 10. 加入1/10体积的3mol/L NaAc及2×体积的冰乙醇,混匀,-20℃放置20分钟左右,DNA形成絮状沉淀。 11. 用玻棒捞出DNA沉淀,70%乙醇漂洗,再在干净吸水纸上吸干。 12. 将DNA重溶解于1ml TE, -20贮存。 13. 取2μl DNA样品在0.7% Agarose胶上电泳, 检测DNA的分子大小。同时取15μl稀释20倍, 测定OD260/OD280, 检测DNA含量及质量。 [注意] 5g样品可保证获得500μg DNA, 足供RFLP、PCR等分析之用。

植物基因组DNA提取试剂盒 【简介】 植物DNA提取试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和缓冲液系统，从植物中分离纯化高质量植物DNA，特殊包被的磁珠，在一定条件下对植物DNA具有很强的亲和力，而当条件改变时，磁珠释放吸附的DNA，能够达到快速分离纯化植物DNA目的。整个过程不涉及有毒试剂，安全、便利、提取的核酸纯度高、质量可靠。使用惠彤TM植物DNA提取试剂盒纯化的植物DNA可适用各种常规模操作，包括酶切、PCR文库建立、分子标记、southern杂交试验。 【特点】 1.耗时少：植物DNA提取周期在40分钟左右 2.取材方便：无须刻意选取植物新鲜材料 3.操作简便：提取过程只需离心一次 4.无毒无害：试剂中不含有氯仿，酚等有毒物质，无需液氮研磨 5.效果稳定：OD260/OD280均在1.7-2.0之间 6.自动化：可配合国内外各类磁棒式核酸提取仪或核酸提取工作站 【使用方法】 1.裂解 取植物组织与研钵中稍加研磨，加入BufferA、研磨均匀，转移至1.5mLEP管中，加入BufferB、BufferC混合均匀，把EP管置于恒温水箱中温育。 2.结合 将EP管从温育设备中取出，离心后取上清，加入振荡混匀的磁珠结合液，颠倒混匀。将EP管置于磁力架上进行磁分离，弃废液（吸净管盖及管底残液）。 3.洗涤 ⑴ 加入洗涤液Ⅰ，点振数次（若有团状或丝状物可增加点振次数及力度），然后磁分离，吸净管盖及管底的残液； ⑵ 加入洗涤液Ⅱ，点振数次（若有团状或丝状物可增加点振次数及力度），然后磁分离，吸净管盖及管底的残液； ⑶ 重复步骤⑵一次； ⑷ 室温下开盖干燥。 4.洗脱 加入洗脱液，放置水浴锅中温育后磁分离，小心吸取上清液至新的EP管中，进行下游实验。 河南惠尔纳米科技有限公司专供