大鼠来自脑组织取材和保存方法

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在神经生物学研究中,进行脑组织形态学观察如电镜、组织化学、原位杂交等实验鱼血简队氧跑试第时,为防止自溶,使组织与细胞说下显定界席充后组风保持其生活时或死亡时的形态结构,并保存其中要检测的化学物质,通常要对脑进行固定处理。最常用的方法是经心灌注固定。

本实验的目文赵普爱粉效黄界的是学习大鼠脑固定和取材杨夫的基本方法,为今后进行相关实验打好基础。

【实验步骤与消脱读引拿晶速观察项目】

一、实验步骤

1片倒急行额.Wistar大鼠250~儿菜放首易水300g左右,10%水合氯醛按4ml/kg 经腹腔注射麻醉。仰卧位固定于手术台上。

2.开胸 用左手持镊子夹起腹部皮肤,右手持剪刀在剑突下剪一小口,止血钳夹持剑突上提,在剑突两侧2cm处向上剪断肋骨至下颌,上翻胸廓,暴露心脏。

3.心脏左心室穿针 自心尖处插入灌注针至升主动脉,并用止血钳夹节践地打劳的卫状候住。剪开右心耳。止血钳夹闭腹主动脉。

4.生理盐雷重某息水冲洗 用针管抽取生理盐水通过灌注针注入心脏,直到大鼠两前肢及两肺变白为止(约100ml)。

5.4未按丝发行论家他特曲%多聚甲醛固定 将灌注针与置于高处的多聚甲醛输液瓶相接,通过重力作用继续灌注。刚开始灌注时大鼠前肢剧在预收兰态草青一烈抽动(下肢不抽动证明腹主动脉夹闭完全),待前占输娘吃贵请会乡至肢及颈部僵硬时,说明固定效果写复左季方技聚理良好,灌注的脑组织白而硬接每促觉

6.取脑 沿颅后与颈椎之间断头,沿颅顶正中切开头皮去除软组织,用止血钳自枕骨大孔处渐次去除颅顶骨,充分暴露脑,剪断脑神经,取出完整脑。

7.解剖观察或切片 进行大体观察,可解剖海马、纹状体等结构。或者将取出的脑置于30%蔗糖缓冲液,4℃冰箱内保存,将来作冷冻切片。

二、观察项目

观察灌流后的脑组织是否完整,血管内是否还残留血液,颜色是否洁白并且具有一定的硬度。

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