PCR荧光定量
用MX-3000做荧光定量PCR,我的质粒用SYBR染料做标准曲线，为什麽CT值总在28-30之间，扩增效率都800以上了，做标准曲线老做不出来，质粒都重复稀释好多次了，我从1ng每微升到1fg每微升稀释7个梯度，最小ct值老是在26以上，间隔也很小，都在0.4左右，且没规律，急求好心人帮忙。
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间隔也很小，都在0.4左右-----估计你没有扩出目的DNA片段，检测到的信号都是引物二聚体跟SYBR结合的结果。 我怀疑你的PCR条件还没调整至最佳条件。你先用浓度最大的那个质粒做模板，进行定性PCR，然后跑电泳，观察是否有目的条带，是否有引物二聚体。记住，有引物二聚体的话，引物二聚体就会和SYBR结合，这样做realtimePCR是不准的。一定要调整至没有引物二聚体，可以考虑提高退火温度及降低引物浓度。 调整好之后，质粒用PCR水做10倍梯度稀释（比如4微升稀释至40微升），如果扩增效率没问题的话，理论上质粒浓度每差10倍，其ct值就相差3.3。另外，如果体系调整好之后，你的质粒最小的还是在26以上的话，最低只能稀释到100倍了，再低就做不出来了
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CT值那么高，应该是没有扩增出目的片段，建议重新设计一下引物以及检查模版，然后做优化。
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