目的在原代培养大鼠皮层星型胶质中明确焦亡是否参与胆红素诱导的神经细胞损伤及炎症反应;调控焦亡是否能抑制胆红素神经毒性,发挥抗炎保护作用。
在胆红素脑病大鼠动物模型上初步探究抑制焦亡核心环节半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(caspase1)活化,是否能减轻胆红素神经毒性,改善胆红素脑病模型鼠的生活能力。
方法原代培养大鼠皮层星型胶质细胞分为胆红素组、VX-765组、对照组:Western blot检测细胞caspase1蛋白和NLRP3蛋白的表达,改良MTT法检测细胞存活率,比色法检测细胞清乳酸脱氢酶(LDH)释放率,EtBr/EthD2染色法检测细胞膜通透性改变,TUNEL法检测染色质DNA断裂,ELISA法检测培养液上清IL-1β和IL-18的水平。建立胆红素脑病动物模型,Western blot检测脑组织caspase1蛋白的表达,ELISA法检测炎症因子IL-1β的水平,免疫荧光染色检测脑组织GFAP蛋白的表达;VX-765干预后动态观察各组新生鼠的神经系统临床表现,记录新生鼠体重变化评估生活能力结果原代培养大鼠皮层星型胶质细胞,胆红素干预6h、12h后,活化型caspase1和NLRP3蛋白表达显著高于对照组(P0.05);与胆红素组相比,VX-765干预可抑制caspase1活化(P0.05),提高细胞存活率(P0.05),降低LDH释放率(P0.05),减少ErBr摄取(P0.05),而不影响EthD2摄取(P0.05),降低细胞TUNEL染色阳性率(P0.01),减少培养液上清IL-1β和IL-18的释放(P0.01)。胆红素脑病动物模型,建模后12h,胆红素组较对照组,脑组织中活化型caspase1表达增加(P0.05),IL-1β水平增高(P0.01),脑组织切片皮层区星型胶质细胞活化(P0.05)。
与胆红素组相比,VX-765组新生鼠建模后异常神经系统表现减少(P0.01),生活能力改善(P0.05)。
结论在原代培养大鼠皮层星型胶质细胞中证实,焦亡参与了胆红素神经毒性的发生机制;抑制焦亡可减轻胆红素神经毒性,发挥抗炎保护作用。在胆红素脑病动物模型上证实,腹腔注射VX-765抑制caspase1活化,可改善胆红素脑病模型鼠的生活能力。
