细胞培养常用试剂配制，哪位达人了解

体外细胞培养过程中使用溶液和培养液的好坏，直接影响到细胞的生长，配制时要十分注意。 一、平衡盐溶液 平衡盐溶液(balanced salt solution，BSS)又称生理盐水或盐溶液，是细胞培养中常用的基本液体。它主要由无机盐和葡萄糖配制而成，起着维持渗透压、缓冲和调节酸碱度等重要作用。 (一)配液时的注意事项 （1）需用新鲜的三蒸水或去离子水，按规定的先后顺序配制，称量要准确，要看清药品的规格、纯度、结晶水的数量等，切勿搞错。 （2）物质的纯度 纯度高的物质配制成的溶液质量高，因此在配液选用时要注意。常用的纯度有优级纯(特级纯)，分析纯（AR）和化学纯（CD）三种类型。 （3）物质的可溶性 很多用于培养用液的化学物质都很难溶解，在配制时必须设法使其溶解。如磷酸钙在碱性溶液中几乎难于溶解，因此在制备磷酸缓冲液时，需将CaCl2及磷酸氢二钠单溶后再混合，临时用NaHCO3调pH至弱碱性，以避免沉淀析出。 （4）物质的不稳定性 不少物质性质不稳定，高温高压下易破坏。如葡萄糖只能在10磅下维持15～20分钟，若超磅葡萄糖就会破坏。 5、贮存液 通常先配制成10倍或100倍的一系列母液，用前临时混合和稀释，过滤除菌备用。 (二)几种常用溶液的配制方法 1、无钙、镁、离子溶液(1000ml) 氯化钠(NaCl) 8g 磷酸二氢钠(NaH2PO4H20) 0.05g 氯化钾(KCl) 0.2g 碳酸氢钠(NaHCO3) 1g 柠檬酸三钠(Na3C6H5O7,H20)1g 葡萄糖 1g 加去离子水或双蒸水至1000mL 2、磷酸盐缓冲液 甲液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液 磷酸氢二钠(无水) 28.4g 氯化钠 8.77g 加去离子水或双蒸水至1000mL 乙液：0.2 mol/L磷酸二氢钠溶液 磷酸二氢钠(无水) 2.4g 氯化钠 8.77g 加去离子水或双蒸水至1000mL 甲、乙液于4℃保存，使用时按表3-2所示比例，配制成所需pH浓度，高压灭菌后室温保存。 表3-2 不同pH浓度所需甲液、乙液量 (mL) pH甲 液乙 液 6.012.587.5 6.22278 6.43268 6.64555 6.85545 7.06436 7.27228 7.47921 3、Hanks液 (1)母液甲(20x)配法 ① NaCl(A.R) 160g KCl(A.R) 8g MgSO4.7H2O（A.R) 2g MgCl.6H2O(A.R) 2g 依次溶于800mL双蒸水中，前一物质溶后再加后一种。 ②CaCl2(A.R)2.8g溶于100mL双蒸水中，溶时不断搅拌（此液应单配，单溶）。 待上述两溶液中的“溶质”全溶后，将它们混合，再用双蒸水补至1000mL，向其中加2mL氯仿作为防腐剂，置4℃保存。 (2)母液乙(20×)配法 ① Na2HPO4.12H2O(A.R)3.04g KH2PO4(A.R) 1.20g 葡萄糖(A.R) 20.0g 溶于800ml双蒸水中。 ②0.4%酚红液 0.4g酚红放在玻璃研钵后加0.01N NaOH 11.28mL，直到全部溶解，移入100mL容量瓶中，加水至100mL，过滤，pH为7.4，4℃保存。 待上述各“溶质”完全溶解后，用双蒸水补至1000mL,其中加氯仿2mL作防腐剂，置40℃保存。 (3)使用液（1×）配法 取母液甲和母液乙各一份，加双蒸水18份，分装后，塞好瓶塞，挂上标志。以115℃高压灭菌25分钟(以免葡萄糖破坏)，置室温后4℃保存，可使用几个月。临用前，用7.5%NaHCO3调至所需pH。 二、其他溶液 1、pH调节液 (1)碳酸氢钠液 可根据需要与使用方便配制10%以下的各种浓度。先用双蒸水溶解后，需经过滤除菌，分装小瓶中。亦可使用高压蒸气灭菌，密封，4℃冰箱保存。市售有5%～10%浓度的安瓿封装品，使用也很方便。在调节pH过程中或超过要求值时，可用高压灭菌的10%醋酸溶液或以CO2调节之。 (2)Hepes缓冲液 是一种可以保持细胞培养过程中pH值较长时间稳定的氢离子缓冲剂。通常使用浓度为10～15mmol/L。配制时，称取所需的Hepes量，用培养液溶解，用1mmol/LNaOH调节pH至7.0，过滤除菌分装小瓶中，4℃冰箱保存。 2、消化液 (1)胰蛋白酶溶液 它是一种黄白色粉末，易受潮，应密封放置阴暗干燥处。它的主要作用是使细胞间的蛋白质水解，从而使贴壁细胞从瓶壁上脱落并使细胞游离分散开来。常用浓度为0.25%或5%。如5%胰蛋白酶溶液配制： 称0.5g粉状胰蛋白酶，溶于100mL无钙镁离子磷酸缓冲液中，置4℃过夜使其溶解，或将称好的胰蛋白酶放入有刻度的烧杯中，先加入一半的磷酸缓冲液，在杯中放入一长短适宜、外周包有塑料或玻璃外壳的磁力棒，将烧杯放置在带有控温和控速的磁力搅拌器上，令磁棒匀速旋转搅拌1-2小时后，胰蛋白酶充分溶解，用滤纸粗滤后，再用玻璃或塑料滤器过滤除菌，分装入小瓶，4℃保存，同时做无菌试验阴性后才能使用。 (2)EDTA(乙烯二胺与乙酸或Versene)溶液 EDTA是一种化学螯合剂，毒性小，对贴壁细胞有离散作用。一般使用浓度为0.02%。称0.1gVersene溶解于500mL无钙镁离子磷酸缓冲液中，15磅30分钟高压灭菌，4℃或室温保存。 (3)胰蛋白酶—EDTA的配制 0.5%胰蛋白酶液96mL，1%EDTA液4mL，无钙镁离子缓冲液100mL。 3、抗生素溶液 为防止细胞培养过程中发生污染，一般在培养液中加入青霉素钠盐和硫酸链霉素，其浓度分别为每毫升含100U和100μg 。配制时取青霉素1×106和链霉素1×106μg,溶于100mL Hanks或PBS中，使其含量为青霉素1×104U/mL，链霉素1×104μg/mL，使用时每100mL培养液中加入0.5~1mL。 4、0.5%台盼兰(Trypan blue)液 称取台盼兰0.5g，溶于100mL磷酸缓冲液中，溶解后滤纸过滤，室温保存。 5、0.1%结晶紫的配制 称0.1结晶紫，溶于0.1N的100mL柠檬酸溶液中，(即2.1g柠檬酸加水100mL)， 置37℃溶解24小时，分装备用。 更详细的信息可以到生物帮那里查找，上面的那些就是在那里找到的，楼主有空的话可以去看下。生物帮那里信息内容丰富、科学、专业，看下 www.bio1000.com/zt/cell/45828.html 那里，应该会有帮助的。