求细胞周期检测方法:PI法操作步骤?

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1.细胞培养:取对数生长期的细胞,按1×及迅范106cells/mL以1mL接种24孔板或2mL接种于6孔板内,进行所需的处理(比如加入药物),特定时间来自后终止培养,进行下一步的实验。

2.细胞固定:800rpm离心5min,收集细胞沉淀,弃上清,用预冷PBS洗涤两次,加入预冷75%乙醇,于360问答4℃固定4h以上。

3.细胞染色:1500rpm离心5min,弃且喜判级空上清,以3mL的PB意数王治衣杂帝良差块害S洗涤一次,加入400uL溴化乙锭(PI,50ug/mL),100ulRNaseA(100ug/mL),4℃避光孵视买育30min。

4.流式分析:以标准程序用流式细胞仪检测,一般计数2~3万个细胞,结果用细胞周期拟和软件ModFit分析。


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