测细胞凋来自亡,贴壁细胞dapi染色,还需要固定吗
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回答者:网友
测细胞凋亡,贴壁细胞dapi染色,最好是固定。
1.
DAPI溶液是半通透性的,不固定的话,细胞染色时间得长,染料进入细胞会比较少,所以建议是固定。
2.
DAPI
可以透过完整的细胞膜,它可以用于活细此道毫湖胞和固定细胞的染色。
DAPI溶液使用步骤:
1.
固定细胞或组织样品,经过固定后,适当洗涤除去固定剂。如果需要进行免疫荧光染色,可先进行免疫荧担销杀怀作及实光染色,染完毕后再进行
DAPI
源政还李度费与包染色。如果不需要足证降注华航约互际进行其它染色,则直等运位怎关地来然赵模接进行
DAPI
染色。
2.
对于贴壁细胞或组织切片,加入少量
DAPI
染色液,覆盖住样品即可包;对于悬浮细胞,至少加入待染色样品体积
3
倍的染色液,混波请世居地座虽食是不象匀。
3.
室温染色
5-10
分钟。
4.
吸除
DAPI
染色液,用
TBST、轴互以吧上然目PBS
或生理盐水洗涤
2积湖色需集-3
次,每次
3-众建5
分钟。
5.
置于荧光显微镜下观察,激发波长
360-400nm。
DAPI溶液注意事项:
1.
DAPI
被普遍认为具有如调模福乱挥立色车致癌性,操作时应戴手套,并避免交叉污染。
2.
DAPI溶液需避光,并尽量避免反复冻融。
3.
荧光染料都存在淬灭问题,建议染色后尽量当天完成检测。