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氨基柱是一种氢键交互式反相色谱柱,常用于对极性化合物的360问答分离。如果要使用流动相梯度进行分离,需要以下步骤:
1. 确定样品的性质和分离要求,选择适当的流动相。常用的是含有乙酸和乙腈的水溶液,如10 mM乙酸-乙腈(95:5)。
2. 优化流动相的组成和梯度程序。一般采用线性梯度或非线性梯配樱册度,根据样品的特性和分离要求来确定最佳梯度程序。
3. 调节柱温、流天板决儿主省衡原继速和检测波长等条件。通常情况下,柱温应控制在25-30℃,流速应根据柱的尺寸半久烟风城曾六和分离的要求来进行调节,检测波长也要根据样品的特性来选择。
4. 进行柱云的平衡和优化。首先要进行柱的平衡,即用流动相进行柱洗,使柱达到平衡状态,然后再进行样品的进样和实验,不断优化流动相的组成和梯度程序,并调整其他条件,以达到最佳的分离推速脚超投互波鸡首效果。
注意事项:
1. 氨基柱较为敏感,必须避免在PH值过高或过低的条件下使颂迹用,最好控制在2-8之间。
2. 柱的洗涤要充分,以避免残留异景掌兴含攻房的样品在下一次分析中培宏干扰结果。
3. 梯度中的每一组分都应该稳定,不能出现水合作用或水解现象。
4. 检测波长要选择适当,对于氨基化合物一般选择210-220nm,对于芳香化合物一般选择254nm。