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免疫细胞(im于承何mune cell)主要是指能识别抗原,产生值末端诗适吃特异性免疫应答的淋巴细培司功省希胞等。淋巴细胞是免疫实什都宗妈需玉较机系统的基本成分,在体内分布很广泛泛,主要是T、B淋巴细胞受抗原刺激而被活化(activation),分裂增殖、发生特异性免疫应答。除T淋巴细胞和B淋巴细胞外,还有K淋巴细胞和NK淋巴细胞,共四种类型。T淋巴细胞是一个多功能的细胞群。除淋巴细胞外,参与免疫应答的细胞还有浆细胞、粒细胞、肥大细胞、抗原呈递细胞及单该市吞噬细胞系统的细胞。免疫穿场械即吃细胞分离技术
1、淋交放巴细胞的分离
取肝素抗凝血1m1 加Hanks 液1m1 稀释后,沿管壁徐徐滴流叠加盛有2m1 淋巴细胞分离液的试管内(注意勿与分放孔灯离液混合,然后2000r/min 水平离心20min,管内分为4 层,自上而下依次为血浆,单个核细胞,颗粒白细胞、红细胞(图2—1)。用毛细管伸至单个核细胞层中(位于细胞分离液与血浆的界面上),沿管壁轻轻吸出全部细胞。然后用Hanks 液洗两次,每次2000r斯克育夜常制兴使物/min 离心10min,最后用RPMI l640 培养液将细胞配成2×短基别蛋屋顶106/m1 的细胞悬液错船吃抗倒备用。
2、T 细胞及B 细胞的分油北海自交危销群离
将淋巴细胞悬液通过*龙棉柱,B 细胞粘附于*龙棉上,T细胞则不粘附,先用RPMI l640 培基洗脱*龙棉柱,流下的细胞的门带亲球酒陈悬液含有丰富的T 细之底座尔始架坚胞。然后用力反复挤压*龙柱、挤出粘附在*龙棉上的B 细胞,并用少量的RPMI l640 培基洗脱,此细胞悬液含有丰富的B 细胞。*龙柱(塑料管)的长短和*龙棉的多少,视分离细胞的多少而定。
3、CD4 细胞及CD8 细胞的分离
(1)CD4 细胞的分离:将一定量的T 细胞悬液通过一根SephDdexC—10 柱,然后用少量的RPMll640 培养洗涤,收获的细胞悬液约含85%的CD4 细胞。
(2)CD8 细胞分离:用Tris 缓冲液稀释羊抗鼠IgG(浓度为10μg/m1)包被一平皿表面,然后放置4℃过夜,没有包被上的抗体用PBS 洗净。然后将已标记有抗CD8 单克隆抗体的T 县回细胞(细胞浓度为1×l07/m1)3m1 加入上述的平皿内,4℃放置2 小时,用PBS 轻轻洗净末粘附的细胞,然后用毛细管加入10m1 PBS 吹打。收集的脱落细胞经洗涤后悬浮在RPMI l640 耐商培基中备用。CD4 细胞亦待祖道治到慢春了车查增可用此法分离。
4、单核巨噬细胞的分离
单核巨噬细胞有粘附塑料或玻璃表面的特性,而淋巴细胞则无此特性,借此可将这两类细胞分开,其方法简述如下。将待分离的细胞悬液(如实物动物的腹腔液)加入适当大小的塑料或玻璃平皿内,置于37℃ C02 温箱内温育1 小时,然后用RPMI 1640 培基轻轻漂洗平皿表面,去除非粘附细胞,再将粘附有细胞的平皿表面用上述培基轻轻洗刷,收集粘附的单核巨噬细胞。如果要获得纯度较高的单核巨噬细胞,可重复上述过程。