琼脂灭菌后不凝固

pH调低了，这种培养基中有苹果酸，这是一种弱酸，pH要慢慢调，而且调pH时要适当高一些。你可以测一下灭菌后的pH，有可能降到5以下了，这种pH不但琼脂不易凝固，而且也不符合你需要延针饭的6.5的要求。如果是自来水配制培养基，水中的钙与磷酸根形成磷酸钙沉淀，问题不大来自。改用蒸馏水就没有了。