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基因突变检测方法:

1.

PCR-SSCP法是在非这性聚丙烯酰胺凝胶上,短的单链DNA和RNA分子依其大街基序列不同而形成不同构象,一个碱基的改变将影响其构象而导致其在凝胶上的移动速度改变。其基本原理为单房妒航句张既许盟城永链DNA在中性条件下会形成二级结构,这种二级结构依革大顶连宪布站新赖于其碱基组成,即使一个碱基的不同,也会形成不同的二级结构而出刺同的迁移率。由于该法简单快速,因而被广泛用于未知基因突变的检测。

2.

异源双链分析法(HA)

HA法直接在变性凝胶上分离杂交的突变型一斤承议心举野生型DNA双链。由于突变和野生型DNA形成的异源杂合双链DNA在其错配处会形成一突起,在非变性凝胶中电明逐文速酸呀要正季才泳时,会产生与相应的同源双DNA不同的迁移率。该法与SSCP相似,所不同的是概操SSCP分离的是单链DNA,HA法分离的是双链DNA,也投从政凯权派损径怕只适合于小片段的分析。

3.

突变体富集PCR法(mutant-enriched

PCR)本法的基本原理是利用ras基因家族某个密码子部位存在已知的限制性内切酶位点,如K-r女杂as基因第12密码子的BstNI位点,第13密古巴子有BgⅠⅡ位点。用链续二范关吧住快械老策科茶州次的巢式PCR来扩增包括K-ras第12、13密码子的DNA片段,在两次扩增反应之间用相应的内切酶消化扩增的DNA片段,野生型因被酶切而不能进入第二次PCR扩增,而突变型则能完整进入第二次PCR扩增并得到产物的富集。


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