大肠菌群测定的操作细则
大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌.该菌主要来于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染居观击夜肠道致病菌的可能.
食品中大肠菌群数系以100mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示.
1 设备和材料
1.1 温箱：36±1℃.
1.2 冰箱:4℃.
1.3 恒温水浴 :44.5±0.5℃.
1.4 天平.
1.5 显微镜.
1.6 均质器钱迅沉落张帮型或乳钵.
1.7 平皿:对握础希零刚食紧直径为90mm.
1.8 试管.
1.9 来自吸管.
1.10 广口瓶或三角烧瓶:容量为500mL.
1.11 玻璃珠:直径约铁挥企夜始处者5mm.
1.12 载玻片只方.
1.13 酒精灯.
1.14 试管架.
2 培养基和试剂
2.1 乳糖胆盐发酵管:按GB 4789.28中4.9规定.
2.2 伊红美蓝琼脂平板:按GB 4789.28中4.25规定.
2.3 乳糖发酵管:按GB 4789.酒机们检律状错儿28中4.10规定.
2.4 EC 货盾通能船货肉汤:按GB 4789.28集热妒收陈裂必中4.11规定.
2.5 磷酸盐缓冲稀释液:按GB 4789.28中3.22规定.
2.6 生理盐水.
2.7 革兰氏染色液:按GB 4789.28中2.2规定.
3 操作步骤
3.1 检样稀释
3.1.1 以无菌操作将检样25mL(或g)放于有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内早食异着米予置适当数量的玻璃珠)或第月鲁纸灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液.固体检样最好起愿女什班落用均质器,以8 0运晶际自深题清检突00-10 000 龙贵立始守至宪甲染急r/min的速度处理1min,做成1:10的均匀稀释液.
3.1.2 用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内,振摇试管混匀,做成1:100的稀地顺发灯职释液.
3.1.3 另取1mL灭菌吸管,按上条操作依次做10倍递增稀释液,每递增稀释一次,换用1支1mL灭菌吸管.
3.1.4 根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择三个稀释度,每个稀释度,接种3管.
3.2 乳糖发酵试验
将二卷变失极又右整编马达待检样品接种于乳糖 胆盐发酵管内,接种量在1mL以上者,用双料乳糖胆盐发酵管,1mL及1mL以下者进卷两余溶茶略务因,用单料乳糖胆盐发酵管.每一稀释度接种3管,置36±1℃ 温箱内,培养24±2h,如所有乳乙质封其弦必工级围引坚糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为大肠菌群阴性,如有产气者,则按下列程序进行.
3.3 分离培养
将产气的发酵管分别转种划你五跟在伊红美蓝琼脂平板上,置36±1℃ 温箱内,培养18-24h,然后取出,观察菌落形态,并做革兰氏染色和证实试验.
3.4 证实试验
在上述平板上,挑取可疑大肠菌群菌落1-2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,置 36±1℃温箱内培养24±2h,观察产气情况.凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌,即可报告为大肠菌群阳性.
3.5 报告
根据证实为大肠菌群阳性的管数,查MPN检索表,报告每100mL(g)大肠菌群的MPN值.
4 粪大肠菌群(faecal coliform)
4.1 用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物(见3.2条)转种于EC肉汤管内,置44.5±0.2℃水浴箱内(水浴箱内的水面应高于EC肉汤液面),培养24±2h,经培养后,如所有EC肉汤管均不产气,则可报告为阴性;如有产气者,则将所有产气的EC肉汤管分别转种于伊红美蓝琼脂平板上,置 培养18-24h,凡平板上有典型菌落者,则证实为粪大肠菌群阳性.
4.2 结果报告
根据证实为粪大肠菌群的阳性管数,查MPN检索表,报告每100mL(g)粪大肠菌群的MPN值.
若有较多典型大肠菌群菌落,革兰氏染色为阴性,即可直接判定为阳性.
若少或均不够典型,应多挑选菌落作证实实验,以免出现假阴性.
SN/T 1897-2007食品中菌落总数的测定也可以用于与食品接触的设备表面的.附录A.
另有自定的
例一：
物体表面采样及检查方法
采样面积
被采表面＜100cm2,取全部表面；被采表面≥100cm2,取100cm2.
采样方法
用5×5cm2的标准灭菌规格板；放在被检物体表面,用浸有无菌生理盐水液的棉拭子1支,在规格板内横竖往返各涂抹5次；并随之转动棉拭于.连续采样1～4个规格板面积；剪去手接触部分,将棉拭于放入装10ml采样液的试管中送检.门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样.
培养（略）
