利用逆转录酶和mRNA模版合成cDNA的主要步骤是什么
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1、以mRNA为模板,以四种脱氧核苷酸作原料,在逆转录酶作用下,合成DNA单链 2、以DNA单链为模板,以四种脱氧核苷酸作原料,继续合成DNA另一条链,两条DNA链形成cDNA
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RT-PCR(25μL) RNA: 5μL dNTP: 10mM 1.25μL;2.5mM 5μL oligod(T):1μL ↓65℃,5min -20℃,2min ↓ M-MLV buffer: 5μL RNasin: 1μL M-MLV: 1μL →37℃,2min→37℃,1h RNase-free ddH2O 补到25μL→70℃,15min -20℃保存
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