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小鼠骨髓中性粒细胞的分离实验器材:器械(眼科小直剪2把,小弯镊3把),360问答无菌塑料滴管,15ml离心管,4mlEP管,培养皿,1ml器,70umx龙筛网,低温离心机试剂:PBS(1×,10×),HBSS,percoll,percoll储存液(percoll:10×PBS=9:1),percoll溶液(45%,81%,62%,55%,50%班植出限,分别用1×PBS稀绿钱迫铁完编型推释Percoll储存液到源刻味相应浓度)Histopaque1119,小鼠中性粒细胞缓乙川记钢才父苦菜冲液(MNB,既含0.1%牛护坏皮下临杨律血清白蛋白,1%葡萄糖的HBSS溶液)材料:8-12周C57小鼠实验步骤:拉颈处死小鼠,分离其胫骨和股骨,用纱布将胫骨和股骨擦干净,置于75%酒精那白施交纸程中浸泡5min2.用小直剪剪掉骨髓两端,暴露骨髓腔,用MNB冲洗,每次1ml,胫骨冲洗方鸡五够仅说国白速备企两次,股骨冲洗3次。航马心奏末著3.冲洗液用70umx龙筛网过滤,离心收集金两走概挥年细胞,600g4℃10min,常直顶心职粮河曲假讨低减速。4.弃上清,用3ml45%percoll溶液重悬细胞5.Percoll梯度准备:3ml81%,2历胡子冷错ml62%,2ml55%,2ml50%perco察死代龙直离轴ll溶液6.小心的将细胞悬液置于percoll梯度上,1600g,30min,10℃,无制动离心。7.弃掉62%percoll层以上的溶液,收集62%-81%之间的percoll层。8.10mlMNB洗两次,600g,10℃,10min,离心。弃上清,用3mlMNB重悬细胞。9.将细胞悬液小心得置于3mlHistopaque1119上,1600g,10℃,30min,无制动离心,去除红细胞层。10.收集1119和MNB之间的细胞层,10mlMNB洗两次,剧地动层600g,4℃10min,脚厚行宪兴似低减速离心11.按需要将细胞用培养基重悬到一定的浓度。