pcr扩增技术需要用什么酶?

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Taq酶

Taq酶是宏早弯从水生栖热菌 Thermus Aquaticus ( T那最随今aq )中分离出的具有睁孝热仅考稳定性的DNA聚合酶。一般常用的Taq酶可以分为rTaq酶和LTaq酶两类,LTaq酶的保真性更强,耐热性也比rTaq酶好。
对于PCR的应用有里程碑的意义,PCR循环包括变性(90 °C左右)、退火(50°C左右)、延伸(70°C左右),每一步对温度的剂液酸婷市极扩安首象要求都不一样,多数酶在高温时即变性失活,该果余燃然而该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,所以不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷。同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。
在应用Taq DNA聚合酶进行PCR反应时,变性往往在94~95°C条件下进行,这也重怀夜治志假是Taq DNA 聚合酶进行30个或者30个以上PCR循环而活力不受到伟景载良缺赵火眼过多损失时所能耐受的最高温度。然而这种酶的保真度不高,因为这种酶的DNA聚合作用依赖于3'-5’校正。
Taq酶在不同温度下的活性
与一般酶不同,用Taq酶扩增DNA时常使片段括食抓觉3'端凸出一个A,应注意.这是因为TaqDNA聚合酶具有一种模板依赖的末端转移酶活性(延伸活性),导致扩增DNA片段在3'末端附加单个的未配对蔽闷的核苷酸。

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