如何提取细胞线粒体

现有传代培养的细胞,想进行线粒体和细胞质分离,请教具体步骤,尤其是破碎细胞的裂解液如何配置... 现有传代培养的细胞,想进行线粒体和细胞质分离,请教具体步骤,尤其是破碎细胞的裂解液如何配置 展开
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提取新鲜心肌组织细胞内线粒体的方案:
肌组织切碎后在4 ℃介质(0.25 mol/L蔗糖、10 mmol/京些富L Tris-HCl pH7.4,0-4℃)中制备心肌组织匀浆。匀浆经750g、离心10 min后留上清,究坐波贵终响至以9000 g离心20 min 后留沉淀,重新悬浮后以9000 g再离心20 min,弃上清得增英殖线粒体.全部操作于4 ℃进行。
培养细胞提取线粒体适次不跳体.细胞弃去培养液后,用细胞收集液作用2到3 min,用scraper,将细胞收集起来,6000 g离色亲章将年成白个画别心15 min。弃上清,之后加细胞匀浆液,用匀浆器干选女剂续且衣方或手动匀浆管匀浆,将装有匀浆液的离心管配平后放入普通离唱多境能心机,以2500 rpm,离心15 min,缓缓取上清液,移入高速离心管中,保存于有冰块的烧杯中.以17000 r事争承义居巴略算外pm离心20 min,弃上清,留取沉淀物。加入0.25mol/L蔗糖与0.003 mol/L氯化钙液l m序片连段l,用吸管吹打成攻费悬液,以17000 rpm离心20 min,将上清吸入另一试管中,留取沉淀物,加入0.1ml 0.25mol/L蔗糖与0.003mol/血振流弱L氯化钙溶液混匀成悬液.即得线粒体。

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