急!!求测定枯草芽孢杆菌的α-淀粉酶的测定方法
书上有提过一种专门用于测定细菌α-淀粉酶的方法,叫BAU法,但在网上找不到具体的操作步骤。 想使用分光光度的方法,网上有一种3,5-二硝基水杨酸的方法,适合用于细菌酶的活性测定?为什么DNS溶液的配制方法差别这么大,有的用DNS溶于12mol/L的****,有点却写2mol/L,有的加酒石酸钾纳,有的加丙三醇?谢谢上面两位的回答!我测的是还原糖的含量,因为用纯净的枯草芽孢杆菌的淀粉酶,不存在需要灭β-淀粉酶的需要。有没有专门测定细菌淀粉酶的实例呢?如果哪位有BAU法(其酶活定义为1min内催化1mg淀粉成为糊精所需的酶量为一个单位酶活)的具体操作步骤,希望能够告知。谢谢!!
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3,5-二硝基水杨酸试剂的配置:准确称取3,5-二硝基水杨酸1g,溶于20mL 2mol/LNaOH溶液中,加入50mL蒸馏水,在加入30g酒石酸钾钠,待溶解后用蒸馏水定容至100mL。盖紧瓶塞,勿使二氧化碳进入。若溶液混浊可过滤后使用。 如果使用3,5-二硝基水杨酸测α-淀粉酶的活性,就必须使β-淀粉酶失活才行。β-淀粉酶不耐热,70度下15min就可钝化。而α-淀粉酶不耐酸,pH3.6以下便可迅速钝化。(摘自:基础生物化学实验指导——吕淑霞主编) 希望能够对你有所帮助!
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方法可能有多种吧~~还有就是加的东西可能跟你要测定的东西有关系~~ 这个实验是先测糖含量吧?这就有区别了~~比如你是测还原糖还是总糖呢~~~。(摘自:基础生物化学实验指导——吕淑霞主编) 希望能够对你有所帮助!
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我做的是加 酒石酸钾钠 方法可能有多种吧~~还有就是加的东西可能跟你要测定的东西有关系~~ 这个实验是先测糖含量吧?这就有区别了~~比如你是测还原糖还是总糖呢~~~
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