为什么上游测序是酶切位点原序列，而下游是互补序列

1）酶应该是够的360问答，如果怕，就多加一点。但问题是如何保证他们能够把所有的两个AB 位点都切开担，如果切不开。那你的片断就多了一截。所以建议最后测热区超城运序验证你的clones。
2）你序列的方向需要验证，因为TA克隆是随机还规力岁插入到载体里面的。所以先用一个载体引物和你的insert引物配对检测得到正确方向插入的clones。
3）PCR 酶切的效果当然不如在质粒上切，我曾经也这样干，效果不好。机现在不这样干了，直接放到案例载体上切吧。 也多花不了多少间。