核酸的降解的定义

一种洁净简便高效降解核酸的方法
技术领域：
本发明涉及利用过氧化物在紫外光照或金属离子存在下，生成羟基自由基，将大分子的核酸非特异性地降解成小片段的方法。
背景技术：
核酸大分子非特异性地降解或分解成合适的片段在许多领域都是非常重要的。这些领域包括1)DNA序列分析；2)DNA足迹技术；3)从细胞中提取蛋白质或酶的分离纯化过程；4)其他需要将大分子核酸降解的领域。
1)DNA序列分析对于大分子核酸如基因组的DNA测序，鉴于每一个测序反应对DNA的长度有限制，一般需要先将大片段的DNA降解成较小的片段。常规方法是用核酸酶处理，或者超声波打段核酸片段，之后电泳分离。核酸酶价格昂贵，在测序之前需要彻底去除；而超声波法间歇性高频率打段核酸大分子的操作过程不易控制，因此合适的降解核酸的方法仍值得探索。
2)DNA足迹技术DNA足迹技术主要用于检测和鉴定转录因子对DNA的序列特异性结合能力，如果同时进行DNA化学测序，即可判段出结合区的精确顺序。该技术仍然是目前最常用的研究DNA-蛋白质相互作用的最常用方法。通常，未与蛋白质结合的DNA都是用DNaseI来解降，但是核酸酶往往分子尺寸太大而不能获得高的分辨率(Chinese ScienceBulletin，2000，45(2)2017-2028)，因此研究开发一类小分子DNA切割剂替代大分子核酸酶将十分有意义(Nature，1988，332(6165)663)。
3)蛋白质或酶的制备从细胞中提取酶等蛋白质分子过程中，首先要经过细胞破碎。细胞破壁之后，其胞内核酸的存在会增加体系的粘度从而干扰酶的分离纯化，特别是进行超滤操作时该现象更为突出。除了某些生物体自身含有高活性核酸酶，不存在此问题以外，一般情况下核酸必须通过加入沉降剂沉降或加入外源的核酸酶降解。另外，如果纯化的目标是以包含体的形式存在，因包含体在形成过程中会结合核酸，因此其预处理也是需要除核酸。
目前公开使用的有多种更专一的沉淀剂，即一些带正电的可以与带负电的核酸磷酸残基形成复合物的物质。按其效率由大到小的顺序，这些化合物是聚乙烯亚胺，阳离子表面活性剂溴化十六烷基三甲基铵，硫酸链霉素以及硫酸鱼精蛋白。同样地，他们也会与某些酶形成我们所不希望存在的复合物。硫酸铵沉淀法可以很有效地除核酸，但同时也会将一些蛋白质去除，影响目的蛋白质的收率。