包涵体蛋白复性怎么做?是不是一般复性成功率很低

网友 1

最佳答案

回答者:网友
复性是指通过去除变性剂使目标蛋白从完全伸展的变性状态恢复到正常的折叠结构,同时去除还原剂确保二硫键正常形成。一般在尿素浓度4M左右时复性过程开始,到2M左右时结束;盐酸胍可以从4M开始,到1.5M 时结束。复性方法主要采用稀释复性,透析复性和柱上复性。稀释复性和透析复性从字面上都好理解,我就不展开了。主要说说柱上复性,因为这种方法的复性得率一般比前面两种要高不上。柱上复性常用的有镍柱柱上复性、分子筛柱上复性、离子交换柱上复性。比较方便的是镍柱和离子交换柱的柱上复性。至于复性得率,看蛋白的,有的蛋白很好复性,有些蛋白则需要摸索很多缓冲液体系,包括加入一些去垢剂等等。上海纽普生物他们做蛋白复性还是很有经验的,据说他们的技术人员以前都是搞蛋白质结构的

我来回答