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1.养293细胞和293T一样。以293T为例，预先准备3个T150瓶的293T细胞，培养基为DMEM+10%FBS，1%Glutamax，1%青霉素-链霉素。2.将细胞分到12分到12个T150瓶中，每瓶的细胞密度是8×106个。3.第二天，镜下检查细胞。始细胞融合度应大致消为足为30-40%，分布均匀。4.转染前1小时，取出细胞板，去除原有细胞培养基，加入20ml的Opti-ME买东M培养基，将细胞送回培养箱。5.取两支无菌的50ml离心管，其中一支面中加入252μgpNL-EGFP/CMV/WPREDU3载体质粒，168μgpCD/NL-BH*DDD包装质粒和84μgpLTR-G质粒，用Opti-MEM培养基补齐到18ml。另一支中加入500μlTrans-EZ溶液和17.5mlOpti-MEM培养基，用电动移液器轻轻混匀。将Trans-EZ稀释液滴360问答加到质粒管中，边加边轻轻晃匀。关键步骤：推荐使用Qiagen质粒大抽试剂盒或相当的试剂盒所制备的质粒。6.室温孵育20分钟，使DNA和Trans-EZ充分结合形成转染复合体。7.取1支5ml的移液管，将得到的DNA-Trans-EZ复合体均匀滴加入到细胞培养板中，每板3ml。来回晃动培养板，混匀后放回到5%二氧化碳培养箱。每一皿细胞培养盘不要超娘过6盘。8.6小时后，移去细胞上清，更换为17ml的DMEM完全培养基。作抓先应图合府9.转染后一天观察细胞，所有的细胞应当都是健康的并且密度接服格近60-80%。如果所转染质粒带有GFP荧光，那么这时候可以看到大于95%的细胞都是带有荧光的。10.将细胞送回培养箱继续培室程死业特服针养2天（36-48小时）。在这个过程中，细胞会逐渐融合形成多核体深宁鲁的压，大多数的细胞依然贴壁。11.收集所有的上清，分装到50ml离心管中。124℃，50周布否背少跟大固0g离心10分钟，除才环去脱落的细胞和大的细胞碎左根验军片。13总的上清约为204ml，用250-ml0.45μmPVDF过滤装置过滤。如果发现滤膜被堵住，表现为过滤速度变慢，更换新的滤器。
