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红细胞凝集试验
(一) 血凝和血凝抑制试验 某此病毒或病毒的血凝素，能选择性地使某种或某几种动物的红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝(hemagglutination，HA)，也称直接血凝反应，当病毒的悬液中先加入特异性抗体，且这种抗体的企电民测比处量足以抑制病毒颗粒或其血凝素，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或其血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制(hemagglutination inhibiion，HI)反应，也称复所职江班司量临副血凝抑制反应。
1.原理 血凝的原理因不同的病毒而有所不同，如痘病毒对鸡的红细胞发生凝集并非是病毒本局身，而是痘病毒的产物类脂蛋白的作用。而流感病毒的血凝作用是病毒囊膜上的血凝素与红细胞表面的受体糖蛋白相互吸附而发生的。见图2-11。
图
2-11 血凝原理示意图
病毒的血凝现象大致可以分为3种类型。
(1) 可逆转型 血凝素与病毒颗粒易分开，经超速离心后，病毒颗粒沉淀于管底，血凝素则游离于上清液内。这种血凝素凝集红细胞的现象是可逆的，即被凝集的红细胞释放了吸附于表面的血凝素后，可再与该血凝素发生凝集，如天花、鼠疫等病毒。
(2) 不来自可逆转型 血凝素与病毒颗粒结合得比较紧密，不经过特360问答殊处理血凝素不能与病毒颗粒分开，这种病毒引起的红细胞凝集，是不可逆转的。在一定的温度 (37℃)下，病毒释放出一种能破坏红细胞表面受体糖苷键的N-乙积似诉推证杆境找威乡酰神经氨酸酶，当病毒颗粒从红细胞表面游离出来后红细胞表面受体已被破坏而失去了再凝集病毒的能力，如流感病毒、鸡新城疫病毒等。
图
2-12 血凝抑改越数书存制原理图
(3) 凝集条件严格型 有些病毒及其血凝素凝集红细胞的条件很严格，这要赶跑条罪宜原预外不仅对不同种动物的红细胞有严格的选择，即是对同种动物，由于性别和年龄的不同，对红细胞的凝集性能亦有差异。如流行性乙型脑炎对公鹅的红细胞凝集性能比对经产老龄母鹅的红细胞凝占集性能好，除此之处，病毒颗粒或其血凝素凝血时对缓冲液的pH值、温度及盐浓度等的要求均很严格。
2. 材料的准备
(1杆九错真须手) 生理盐水
(2) 红细胞酸保存液 (阿氏液) 的配制 (Acid-citrate-dextrose，简称“ACD”)
氯化钠 4.2g
枸橼酸钠 娘乡注 8.0g
枸橼酸 x粉杆底威频住从外跟 0.55g
葡萄糖 20.5g
加去离子水至 1000ml
0.075MPa、15min高压后置4℃备用。
(3)病毒抗原 旧课把伯初办(血凝素) 稀释液 ( 0.4%pH9.0BABS) 的配制 不同的病毒抗原 (血凝损频快杨素调达军清一点素) 需用不同的稀释液。如鸡新疫血凝素用生理盐水稀释庆么回扬罗异灯孔。流行性乙型脑炎血步任缩异价销其味凝素需用0.4% pH9直.0BABS稀释液。 pH9.0BABS液的配制:
① 母液的配制
0.5mol/L硼酸溶液： 硼酸30g
加去离子水至 1 000ml
溶解后地现备用。
1.0mol/L****溶液：
NaOH 40g
加规量翻口斯先决入离子水至 1 000ml
溶解置3天后使用。
1.5mol/L氯化钠溶液：
NaCl 87.7g
加入离子水至 1 000ml
0.075MPa、15min高压后置4℃备用。
② 硼酸****盐溶液 (pH9.0、BHS) 的配制
0.5mol/L硼酸溶液 100ml
1.0mol/L NaOH溶液 24ml
1.5mol/L NaCl溶液 80ml
加去离子水至 1 000ml
充分混匀后调pH值为9.0
③ 使用液（0.4%pH9.0BABS）的配制（现配现用）
pH9.0 BHS液 100ml
牛血清白蛋白 0.4g
充分溶解后使用，现配现用。
(4)白陶土
(5)不同pH值的红细胞稀液的配制 虫媒病毒对缓冲pH值的要求都很严格，流行性乙型脑炎病毒要求红细胞在pH5.8-6.6的PBS稀释液内才能凝集。
