根据研究项目具体情况和要求把目的基因和与细胞内靶基因特异片段同源的DNA 诗降了业切批食片段都重组到带有标记基因(如neo基因，TK基因等)的载体上，成为重组的Knockout载体。
条件性基因敲除小鼠的设计利用了Cre/LoxP或Flipe/Frt原理.它们都是位点特异性重组酶系统.这里以Cre/LoxP系统为例.比如在待敲除的一段目标DNA序来自列的两端各放置一个loxP序列,得到flox(flanked by loxP)小鼠.将flox小鼠与带有细胞特异性表达Cre的小鼠交配繁殖,以获得在特定细胞里把目标基因敲除掉的小鼠,即条件性基因敲除小鼠.此外,若与控制Cre表达的其他诱导系统(比如CreERT2)相结合,还可以对某册芹一基因同时实现时空两美害门族方面的调控。
Cre/loxP系统来源于噬菌体,可以介导位点特异的DNA重组.该系统含有两个组成成分：一个是州仿毕一段长降关剂构笑批号34bp的DNA序列(L社既轻步赵晚久间关收续oxP序列),含有两个13 bp的反向重复序列和一个8 bp的核心序列.LoxP的方向由中间这8个碱基绍满握府决定.这段LoxP序列是Cre重组酶识别的坏位点.令一个组成部分是Cr夜风副观底顺选路年晶远e重组酶.它是由噬菌体编码的一种由343个氨基酸组成的蛋白.Cre可以介导两个LoxP位点的重组然异密谓,从而引起两个LoxP之间DNA序列的缺失.如果将Cre重组酶cDNA通过基因工程的手段置于组织或细胞特异性启动子之下,可以得到Cre组织/细胞特异性表达的Cre小鼠推货讲会条底若川费玉,也叫Cre工具小鼠.跟Flox小鼠大陪交配之后,可以得到条件性等低严路呼教精基因敲除小鼠。
所谓Flox小鼠是指在某个基因绿的某个外显子两侧各放一个LoxP序列.这段序列就是Flanked by LoxP,也就叫做Flox小鼠.这种Flox小鼠一般要通过设计构建打靶载体、胚胎干细胞重组、囊胚显微注射、和嵌合体小鼠传代来获得.这种小鼠跟Cre工具小鼠交配,由于Cre的表达,介导两个LoxP位点序列的重组,从而敲除两个LoxP之间的序列.由于不同Cre工具小鼠的Cre表达有组织/细胞特异性,就可以达到在不足掌同组织、细胞里特异性敲皇省州图银除目的基因的目标.比如上皮细胞、胸腺细胞、T细子损广显居高日艺管胞、B细胞、心肌细胞、肠道、肺脏等。
