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回答者:网友
.dna提取的几种方法
(1).浓盐法
利来自用rnp和dnp在采送象电解溶液中溶解度360问答不同,将二者分离,常用的方法是用1m
氯
纳提取化钠抽提,况父联结督席面管音确百得到的dnp粘液与含有少量辛醇的
氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间,而dna位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将d绝油极右范维沉酒缺na
钠盐沉淀出来.
也可用0.15
mnacl液反复洗涤细胞破碎液除去rnp,再以1mnacl提取脱氧核糖念控么决示日约决农蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.
两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.
以稀盐酸溶液提取dna
时,加入适量去污剂,如sds可有助于蛋白质与dna
的分离。在提取过程中为抑制组织中的dnase对dna
的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15mnacl,0.015m柠檬钠,并称ssc溶液,提取dna.
(2).阴离子去污剂法:
用北考紧sds或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取dna
.由于细胞中dna械作适与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去说兰实吧污剂提取dna.
(3).苯酚抽提法:
苯酚作酸体报鱼为蛋白变性剂,同时抑制了dnase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与dna
联结键已断,蛋听么白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相,而dna溶于水相。离心分层后取出水层,多次重复操作,再合并含dna
的水相,利用核酸不溶于醇的性质,用乙醇夫身济无蛋管安倍表至沉淀dna
。此时dna是十分粘稠的物质,可用玻璃漫漫绕成一团,取出。此法的特点是使提取的dna保持天然状态
.
(
4).水抽提法:
利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去rna包创肥冲况杂创答,然后将沉淀溶于水中,使dna充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6m.加入2倍体积好失95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66%
٠80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得dna样品.此法提取的dna中蛋白质含量较高,故一般不用致里建光列势后.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入sds.