农杆菌转化法的步骤

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1、农杆菌培养至适当浓度。

2、受体材料消毒处理并切成适当大小组织块。

3、组织块浸泡于菌液中适当的时间。

4、浸泡过的组织块放于共培养基上培养。

5酸学你、组织块转移到筛选培养基上培养问根理础别以概,选出阳性幼苗。检测方法根据实验目的不同而不同。可以用PCR扩增目的片段;如果有报告基族高因GUS、GFP等也可希数种混山洲刚必脚以进行染色或荧光观察。

原理:

选择一种特制的空质粒载体(如PBI121质粒载体),其上要求含有T-DNA边界序列(此处可参见词条双元表达载体系统),在序列之间含有复制原点、抗性基因、GUS报告基因、Hind Ⅲ和BamH I 等酶切位点(以上兆差尺这些构成了一个T-DNA区承娘)。先通过双酶切反应酶切空质粒载体和目的基因,再通过酶连反应庆埋连接空质粒载体和目的基因,从而构建成完整的重组质粒。

以上内容参考:百度百科-农杆菌转化法


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